β-半乳糖苷酶試驗(yàn)的原理與方法是什么?
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(1)原理:有的細(xì)菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,能分解鄰硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黃色的-硝基酚(O-nitrophenol),在很低濃度下也可檢出。
(2)試劑:0.75MONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸餾水中,在加入緩沖液(6.9gNaH2PO4,溶于45ml蒸餾水中,用30%NaOH調(diào)整pH為7.0,再加水至50ml)5ml,置于4℃冰箱中保存。ONPG溶液為無色,如出現(xiàn)黃色,則不應(yīng)再用。
(3)方法:從培養(yǎng)基上取菌,于0.25ml無菌生理鹽水中制成菌懸液,加入一滴甲苯并充分振搖,使酶釋放。將試管置37℃水浴5分鐘,加入0.25mlONPG試劑,水浴20分鐘~3小時觀察結(jié)果。
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