β-半乳糖苷酶試驗的內(nèi)容是什么?醫(yī)學教育網(wǎng)小編整理如下,希望對各位檢驗職稱考生備考復習有所幫助。
β-半乳糖苷酶試驗
原理:有的細菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,能分解鄰硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黃色的-硝基酚(O-nitrophenol),在很低濃度下也可檢出。
試劑:0.75MONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸餾水中,在加入緩沖液(6.9gNaH2PO4,溶于45ml蒸餾水中,用30%NaOH調整pH為7.0,再加水至50ml)5ml,置于4℃冰箱中保存。ONPG溶液為無色,如出現(xiàn)黃色,則不應再用。
方法:從培養(yǎng)基上取菌,于0.25ml無菌生理鹽水中制成菌懸液,加入一滴甲苯并充分振搖,使酶釋放。將試管置37℃水浴5分鐘,加入0.25mlONPG試劑,水浴20分鐘~3小時觀察結果。
結果:菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應,一般在20~30分鐘內(nèi)顯色。
應用:迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性,而不發(fā)酵乳糖的細菌為陰性。本實驗主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。
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