樣本的質(zhì)量控制是醫(yī)學檢驗主管技師考試需要了解的知識點，醫(yī)學教育網(wǎng)小編搜集整理了相關(guān)內(nèi)容，希望對廣大復習備考的考生有所幫助。

用于流式分析的樣本種類很多，包括外周血、骨髓穿刺液、骨髓活檢物、組織活檢物、漿膜腔積液、腦脊液、皮膚、黏膜（內(nèi)窺鏡活檢物）、細針穿刺物等等。樣本的條件控制可能是免疫表型分析質(zhì)控最困難的環(huán)節(jié)之一。每種樣本都有不同的采集、保存、運輸和制備要求。

首先，觀測樣本外觀：有嚴重溶血、凝聚或壞死的樣本應棄用。

第二，單細胞懸液的獲取：外周血和骨髓穿刺液為天然單細胞懸液；活檢組織常用機械分離和酶消化兩種方法。不同的實驗要求適用不同的方法。對于需要進行膜抗原標記的，不僅是要獲得足夠的單細胞懸液，還要盡量保證細胞結(jié)構(gòu)的完整性和抗原性，機械法較適用。只需進行細胞周期或DNA倍體分析的，在機械法的基礎上加酶消化（如胰蛋白酶、胃蛋白酶等）較適用。

第三，抗凝劑的選擇：外周血標本可采用EDTA、ACD或肝素抗凝。如果用同一份血標本做白細胞計數(shù)和流式分析，則應用EDTA抗凝；對于血小板分析的實驗，一般不用肝素抗凝。骨髓穿刺液常用肝素或EDTA抗凝。由于相對大量的ACD會通過改變pH而影響骨髓細胞活性問題，通常不推薦用ACD作骨髓穿刺液的抗凝劑。

第四，樣本的保存：理想狀態(tài)下，樣本應在采集后立刻進行處理和染色。肝素抗凝的血和骨髓通?？杀４嬷?8-72小時/室溫（16-25）；EDTA抗凝的外周血和骨髓可保存12-24小時/室溫（16-25）；ACD抗凝的外周血可保存至72小時/室溫（16-25）；對于只作胞內(nèi)染色的樣本，可固定細胞以長期保存。但此“固定－染色”的方法取決于要分析的抗原特性和染色方式。

第五，去除紅細胞的方法：紅細胞裂解法，操作簡單、快、并最可能保持原始標本的白細胞分布。最好在染色后溶血。若在染色前溶血，需確認：1）抗原性不被溶血過程改變；2）溶血劑被徹底洗去，細胞和抗體結(jié)合的動力反應未受影響；3）所用溶血劑不含固定劑，否則會影響細胞活性及表面標記結(jié)果。密度梯度離心法，靶細胞回收較好并可能得到富集，同時去除紅細胞、碎片等，但費時，某些重要細胞群體可能被選擇性丟失。

第六，細胞與抗體的比例：廠家推薦的抗體用量通常是假定靶細胞數(shù)量在5X105～1x106范圍內(nèi)。有些標本沒有足夠的細胞，有些則由于細胞量大，正常濃度下的抗體相對過量或不足，導致假陽性或假陰性結(jié)果。因此，每個實驗室應根據(jù)不同于廠家推薦的方法，調(diào)整細胞與抗體用量，得到最適的細胞/抗體比例。

第七，細胞活性的鑒定：死細胞對許多抗體均有很強的非特異性染色，這就使樣本細胞活性檢測變得非常重要，尤其是經(jīng)過了長時間運輸和儲存的樣本。檢測的方法通常有兩種：

1）實時的流式檢測：利用熒光染料碘化吡啶（PI）、7氨基放線菌素D（7-AAD）或EMA（ethidiummonoacide）進行死細胞染色，而活細胞拒染這些染料。此方法的優(yōu)勢是細胞表面標志和活性分析可同時進行。尤其適用于高度壞死的樣本。7-AAD最常用，因為在488nm激發(fā)下，其最大發(fā)射光在670nm左右，適合與FITC或PE進行多色標記。但隨著時間延長，7AAD會在固定的細胞群體重新分配，死活細胞的區(qū)分變得困難。因此，對于染色并在固定后12小時以上分析的標本，最好用EMA.EMA與死細胞DNA穩(wěn)定的共價結(jié)合保證了長時間固定后仍能很好地區(qū)分固定前的死活狀態(tài)。

2）手工檢測：使用Trypanblue或其他細胞活性染料。

3）使用專門的儀器進行檢測。如Vi-cell.