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    [寄生蟲學(xué)]第二節(jié) 寄生蟲人工培養(yǎng)

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      一、溶組織內(nèi)阿米巴培養(yǎng)。

      1.營養(yǎng)瓊脂雙相培養(yǎng)基

     ?、殴腆w部分:牛肉浸膏3g;蛋白胨5g;瓊脂 15g;液體1000ml(見“液體部分”)。

     ?、埔后w部分:氯化鈉8g;氯化鉀0.2g;氯化鈣0.2g;氯化鎂0.01g;磷酸氫二鈉2g;磷酸二氫鉀0.3g;蒸餾水1000ml.

      制備先配液體部分2000ml,氯化鈣與氯化鎂另裝小瓶,高壓滅菌(壓力6.81公斤20分鐘)后冷卻,合并一起,取1000ml配固體部分,經(jīng)沸水浴2~3小時,使完全溶解。若有殘渣可用4層紗布過濾除去,趁熱將濾液分裝試管,每管5ml,高壓滅菌,形成斜面,冷卻后放冰箱中備用。接種前,每管加液體部分4.5ml和牛血清0.5ml,并加米粉20mg(用大米粉分裝小管,經(jīng)180℃烤箱消毒3次)。

      2.洛克氏液雞蛋血清培養(yǎng)基

      ⑴培基成分:洛克氏液70ml;滅活血清(每管加0.5ml);米粉(每管加20mg);雞蛋4個。

     ?、坡蹇耸希↙ocke)液:氯化鈉9g;氯化鈣0.2g;氯化鉀0.4g;碳酸氫鈉0.2g;葡萄糖(壓力3.63公斤15分鐘)2.5g;蒸餾水1000ml.

      制備先配洛克氏液1000ml,取雞蛋用肥皂水洗刷凈,以70%酒精洗凈后,破殼將蛋黃、蛋清傾入含70ml洛克氏液的小三角燒瓶內(nèi),加有玻璃珠,充分搖動使其內(nèi)含物混合,之后分裝消毒試管內(nèi),每管約5ml,置斜位在70℃下經(jīng)1小時凝固斜面,翌日再置高壓消毒20分鐘。接種前每管加洛克氏液4.5ml、馬血清0.5ml、米粉20mg。

      二、陰道毛滴蟲培養(yǎng)

      常用肝-胨-糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法。

      1.培養(yǎng)基的配制:15%肝浸液100ml;蛋白胨2g;葡萄糖0.5g。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

      將以上成分混合,加熱使溶,經(jīng)濾紙過濾,調(diào)節(jié)pH至5.5~6.0.每管分裝5ml,8磅20分鐘高壓滅菌,冷卻后,置37℃恒溫箱中24小時,證明無菌后,貯存于冰箱備用。接種前每管加滅能無菌馬血清1ml,即可用。

      15%肝浸液的制備:取?;蛲酶?5g,洗凈,剪碎如小米粒大小,浸入100ml,蒸餾水中,置冰箱過夜,次日煮沸半小時,用4層紗布過濾除去渣滓,補充蒸餾水至100ml,即成15%肝浸液。

      2.培養(yǎng)方法①以無菌棉拭從陰道后穹窿處取分泌物,無菌接種入上述的培養(yǎng)基中;②初次接種和第1、2次轉(zhuǎn)種時,應(yīng)加青霉素5~10萬單位/2ml培基;③培養(yǎng)溫度為35~38℃為宜;④pH在5.4~6.8之間。

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