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    酶免疫技術(shù)的固相載體

    2009-09-17 14:18 來源:
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      酶免疫技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體的物質(zhì)很多,最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式,在測定過程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng),加之它的價格低廉,所以被普遍采用。

      聚苯乙烯載體的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點是還能兼作反應(yīng)的容器,最后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗,效果更好。最常用的載體為微量反應(yīng)板,專用于ELISA測定的產(chǎn)品也稱為ELISA板,國際通用的標(biāo)準板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標(biāo)本的檢測,并可在特定的比色計上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標(biāo)準化極為有利。

      良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計算所有讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%。

      與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯醫(yī)學(xué)教丨育網(wǎng)整理乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特點為質(zhì)軟板薄,可切割,價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時也略高。

      為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,可用以下方法加以檢驗:用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和一個典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進行測定,然后比較測定結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果判別最大,這種載體就是這一ELISA測定的最合適的固相載體。

      除塑料制品外,固相酶免疫測定的載體還有兩種材料:一是微孔濾膜,如硝酸纖維素膜、尼龍膜等,這類測定形式將在本章“膜載體的酶免疫測定”中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的,反應(yīng)時固相微粒懸浮在溶液中,具有液相反應(yīng)的速率,反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵吸引作為分離的手段,洗滌也十分方便,但需配備特殊的儀器。

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