血糖測定是檢查有無糖代謝紊亂的最基本和最重要的指標(biāo)。
?。ㄒ唬颖荆貉獫{或血清。
血糖測定一般可以測血漿、血清和全血葡萄糖。由于葡萄糖溶于自由水,而紅細胞中所含的自由水較少,所以全血葡萄糖濃度比血漿或血清低10%~15%,且受紅細胞比容影響。一般來說用血漿或血清測定結(jié)果更為可靠。除與標(biāo)本的性質(zhì)有關(guān)外,血糖測定還受飲食、取血部位和測定方法影響。餐后血糖升高,靜脈血糖 < 毛細血管血糖 < 動脈血糖。所以如果不是特殊試驗,血糖測定必須為清晨空腹靜脈取血。
取血后如全血在室溫下放置,血糖濃度每小時可下降5%~7%(約10mg/dl)左右;如立即分離血漿或血清,則可穩(wěn)定24h。如不能立即檢測而又不能立即分離血漿或血清,就必須將血液加入含氟化鈉的抗凝瓶,以抑制糖酵解途經(jīng)中的酶,保證測定準確。
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1.氧化還原法:(Folin-Wu法)葡萄糖可使二價銅離子還原為一價銅離子,然后一價銅離子又可和某些化合物顯色進行測定。葡萄糖與堿性銅試劑共熱與磷鉬酸成藍色鉬蘭。
該法易受血中其他還原糖的干擾,現(xiàn)已淘汰。
2.縮合法:鄰甲苯胺法(0-TB法)
利用鄰甲苯胺類在酸性環(huán)境中可與葡萄糖醛基縮合成葡萄糖基胺,后者脫水生成Schiff氏堿,再經(jīng)結(jié)構(gòu)重排,生成有色物質(zhì)。
該法操作簡便,靈敏度高,主要缺點是試劑腐蝕性大,鄰甲苯胺被懷疑有致癌性,既有礙于健康又易損壞儀器。
以上非酶法均為非特異性方法,由于非糖還原物質(zhì),如谷胱甘肽,維生素C、肌酸、肌酐、尿酸等也都能參與反應(yīng),可使結(jié)果比酶法偏高0.3~0.6mmol/L。
3.酶法:包括葡萄糖氧化酶-過氧化物酶(GOD-POD)偶聯(lián)法、己糖激酶(HK)法和葡萄糖氧化酶-氧速率(GOD-OR)法。
酶法采用特定的酶促生化反應(yīng)步驟,因此具有特異性高。
(1)葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法(GOD-POD法):目前應(yīng)用最廣泛的常規(guī)方法。
505nm比色,其色澤深淺與葡萄糖濃度成正比。
評價:準確度、精密度、靈敏度和穩(wěn)定性良好是目前血糖測定的首選方法。
GOD催化的反應(yīng)特異,只有葡萄糖反應(yīng),POD不特異受干擾因素較多,如血中有還原性物質(zhì),如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等可使H202還原為H2O,可致結(jié)果偏低。
?。?)葡萄糖氧化酶-氧速率法(GOD-OR法):葡萄糖氧化酶每氧化標(biāo)本中的一分子葡萄糖便消耗一分子氧,用氧敏感電極測定氧消耗速率,便可知葡萄糖含量。此法準確性和精密度都很好,但只能用于特殊的分析儀。
(3)已糖激酶法(HK法):是目前公認的參考方法。
NADPH在340nm有吸收峰,其吸光度增加與葡萄糖濃度成正比。
該反應(yīng)第一步不特異,任何己糖均可參與,第二步特異,只有G-6-P才能反應(yīng)。
評價:本法準確度和精密度高,特異性高于葡萄糖氧化酶法。干擾因素少,輕度溶血、脂血、黃疸、肝素、EDTA等不干擾測定。
試劑較貴。
?。ㄈ﹨⒖贾担?.61~6.11 mmol/L(65~110mg/dl)。
?。ㄋ模┡R床意義
1.診斷高血糖癥和糖尿病:血糖濃度>7.0mmol/L(126mg/dl)稱為高血糖癥。引起高血糖癥的原因很多,有生理性和病理性。
2.診斷低血糖癥:血糖濃度<2.8mmol/L(50mg/dl),稱為低血糖癥。引起低血糖的原因很復(fù)雜,主要有:空腹低血糖、反應(yīng)性低血糖、藥物引起的低血糖等后述。