凝血儀的原理:
止血與血栓分子標(biāo)志物的檢測(cè)指標(biāo)與臨床各種疾患有著密切聯(lián)系,如動(dòng)脈粥樣硬化,心腦血管疾病、糖尿病、動(dòng)靜脈血栓形成,血栓閉塞性脈管炎、肺栓塞、妊娠高血壓綜合癥、彌散性血管內(nèi)凝血、溶血尿毒綜合癥、慢性阻塞性肺炎等。中醫(yī)藥關(guān)于活血化瘀的理論與治療工作研究也都涉及止血與血栓問(wèn)題。為使臨床準(zhǔn)確運(yùn)用這些指標(biāo)進(jìn)行診斷,衛(wèi)生部印發(fā)了《關(guān)于出凝血時(shí)間檢驗(yàn)方法操作規(guī)程》,對(duì)活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)和血漿凝血活酶時(shí)間(PT)等操作方法進(jìn)行了詳細(xì)規(guī)范。因此使用血液凝固分析儀(以下簡(jiǎn)稱(chēng)凝血儀)對(duì)血栓和止血進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查成為必要。凝血儀分為全自動(dòng)與半自動(dòng)兩類(lèi)。本文僅涉及半自動(dòng)凝血儀工作原理并對(duì)德國(guó)BE公司的半自動(dòng)凝血儀做簡(jiǎn)要介紹。
目前國(guó)內(nèi)外各生產(chǎn)廠(chǎng)家生產(chǎn)的半自動(dòng)凝血儀都是基于凝固法對(duì)血液凝固過(guò)程進(jìn)行測(cè)量的。血液凝固是一系列凝血因子連鎖性酶反應(yīng)的結(jié)果。血液中的凝血因子以無(wú)活性酶原形式存在,當(dāng)某一凝血因子被激活后,可使許多凝血因子按一定的次序先后被激活,彼此之間有復(fù)雜的催化作用,被稱(chēng)為“瀑布樣學(xué)說(shuō)”。這種“瀑布樣學(xué)說(shuō)”產(chǎn)生的激變?cè)谘旱纳镂锢硖匦陨媳憩F(xiàn)為,電阻增大(電流法)粘度增強(qiáng)(磁珠法),濁度上升(光學(xué)法)。由于電流法測(cè)量可靠性差,因此為磁珠法和光學(xué)法醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
1、光學(xué)法(比濁法)
光學(xué)法凝血儀是根據(jù)血漿凝固過(guò)程中濁度的變化來(lái)測(cè)定凝血功能。根據(jù)儀器不同的光學(xué)測(cè)量原理,又可分為散射比濁法和透射比濁法兩類(lèi)。
(1)散射比濁法:散射比濁法是根據(jù)待驗(yàn)樣品在凝固過(guò)程中散射光的變化來(lái)確定檢測(cè)終點(diǎn)的。在該方法中檢測(cè)通道的單色光源與光探測(cè)器呈90O直角,當(dāng)向樣品中加入凝血激活劑后,隨樣品中纖維蛋白凝塊的形成過(guò)程,樣品的散射光強(qiáng)度逐步增加。當(dāng)樣品完全凝固以后,散射光的強(qiáng)度不再變化,通常是把凝固的起始點(diǎn)作為0%,凝固終點(diǎn)作為100%,把50%作為凝固時(shí)間。光探測(cè)器接收這一光學(xué)的變化,將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào),經(jīng)過(guò)放大再被傳送到監(jiān)測(cè)器上進(jìn)行處理,描出凝固曲線(xiàn)。
(2)透射比濁法:透射比濁法,是根據(jù)待測(cè)樣品在凝固過(guò)程中吸光度變化來(lái)確定凝固終點(diǎn)的、與散射比濁法不同的是該方法的光路同一般的比色法一樣呈直線(xiàn)安排:來(lái)自光源的光線(xiàn)經(jīng)過(guò)處理后變成平行光,透過(guò)待測(cè)樣品后照射到光電管變成電信號(hào),經(jīng)過(guò)放大后監(jiān)測(cè)處理。當(dāng)向樣品中加入凝血激活劑后,開(kāi)始的吸光度非常弱,隨著反應(yīng)管中纖維蛋白凝塊的形成,標(biāo)本吸光度也逐漸增強(qiáng),當(dāng)凝塊完全形成后,吸光度趨于恒定。凝血儀可以自動(dòng)描繪吸光度的變化曲線(xiàn)并設(shè)定其中某一點(diǎn)對(duì)應(yīng)的時(shí)間為凝固時(shí)間醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
2、磁珠法
磁珠法是根據(jù)血漿凝固過(guò)程中粘度的變化來(lái)測(cè)量凝血功能的。根據(jù)儀器對(duì)磁珠運(yùn)動(dòng)測(cè)量原理的不同,又可分為光電探測(cè)法和電磁珠探測(cè)法。
(1)光電探測(cè)法:在磁珠法中光電探測(cè)器的作用與光學(xué)法中不同,它只測(cè)量血漿凝固過(guò)程中磁珠的運(yùn)動(dòng)規(guī)律,與血漿的濁度無(wú)關(guān)。在磁珠法中的一對(duì)電磁鐵安放在測(cè)試杯的兩端,它們產(chǎn)生恒定的交替磁場(chǎng)使磁珠在測(cè)試杯中擺動(dòng),在與磁珠擺動(dòng)的垂直方向安放一對(duì)光電接收裝置,當(dāng)磁珠擺幅衰減到50%時(shí)確定凝固終點(diǎn)醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。
(2)電磁探測(cè)法:電磁探測(cè)法又可稱(chēng)為雙磁路磁珠法,其中一對(duì)磁路用于吸引磁珠擺動(dòng),另一對(duì)磁路利用磁珠擺動(dòng)過(guò)程中對(duì)磁力線(xiàn)的切割所產(chǎn)生的電信號(hào),對(duì)磁珠擺動(dòng)幅讀度進(jìn)行監(jiān)控,當(dāng)磁珠擺動(dòng)幅度衰減到50%確定凝固終點(diǎn)。
光學(xué)法和磁珠法用于凝血檢測(cè),就方法論而言各有千秋,光學(xué)法的優(yōu)點(diǎn)在于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、靈敏度高。易于自動(dòng)化等。缺點(diǎn)在于易受特異血漿干擾,對(duì)此各廠(chǎng)家已采取不同措施予以彌補(bǔ)。磁路法優(yōu)點(diǎn)不受特異血漿的干擾,試劑量少,缺點(diǎn),磁珠的質(zhì)量、杯壁的光滑程度等,均會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果造成影響。一些廠(chǎng)家為推銷(xiāo)自身產(chǎn)品在方法論上大做文章,片片面強(qiáng)調(diào)某種方法的優(yōu)越性是不足取的。其一目前各國(guó)生產(chǎn)的凝血儀兩類(lèi)方法并存,且光學(xué)法占據(jù)主導(dǎo)地位,在全自動(dòng)凝血儀中尤其如此。其二判斷儀器的優(yōu)劣有多種方面包括方法、設(shè)計(jì)、工藝等。
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