分光光度法的技術(shù)是生化檢驗必不可少的一項知識點，檢驗人員都應(yīng)該了解的，醫(yī)學教育網(wǎng)整理了相關(guān)內(nèi)容，希望能夠幫到大家。

設(shè)計得當可用于各種酶的測定是一些可用于分光光度法的氧化還原物質(zhì)特性。

分光光度法的技術(shù)原理：利用NAD（P）H和NAD（P）吸收光譜差異建立的測酶活性濃度方法。NAD（P）H在340nm處有一吸收峰，而NAD（P）在此波段卻毫無吸光性。因此建立了一類和原來比色法截然不同方法。醫(yī)/學教育網(wǎng)搜集整理不需停止酶反應(yīng)，在340nm根據(jù)吸光度變化，就可觀察到酶反應(yīng)變化全過程。

此外，還可利用黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）來測定各種含這二個輔基的酶。它們的氧化型在450nm有一很強吸收峰，而還原型的吸光度很低，同樣細胞色素還原型在可見光有一個非常明顯和很窄的吸收峰，都使人們很容易用分光光度法研究這些酶的作用。上述物質(zhì)主要用于氧化還原酶的測定。

科學家還設(shè)計出一系列人工合成酶的底物，用于其它酶的分光光度法測定。例如合成了很多對硝基酚的衍生物，用于各種水解酶的測定。堿性磷酸酶底物磷酸對硝基酚就是一個成功例子。又如測芳香基硫酸酯酶，可使用人工合成的硫酸對硝基酚為底物，其分解產(chǎn)物的吸收峰由原來的278nm變?yōu)?18nm，Webb成功地在330nm進行此酶監(jiān)測。

分光光度法的上述原理還可以用于其它酶的測定，如烯醇化酶、延胡索酸水解酶的底物由于含不飽和鍵，在330nm處有很強吸收峰，而酶作用產(chǎn)物無此不飽和鍵。則不難在330nm處對這些酶進行直接測定。

此后在分光光度法的發(fā)展過程中又導(dǎo)入了酶偶聯(lián)技術(shù)。使得分光光度法幾乎能測定所有的酶。因此臨床實驗室工作者如不能很好掌握分光光度法的技術(shù)，不了解各種影響因素，要作好酶的測定是很困難的。