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    招生方案

    蛋白質(zhì)定量常用方法

    2014-05-18 11:32 來源:
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    1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚試劑比色法 由于各種蛋白質(zhì)分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同,特別是白蛋白含色氨酸為0.2%,而γ-球蛋白中含量達2%-3%,導(dǎo)致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中加入Cu2+,集中原法和雙縮脲反應(yīng)兩者的作用,使呈色靈敏度提高。其中75%的呈色依賴于Cu2+.反應(yīng)產(chǎn)物最佳吸收峰在650-750nm,方法靈敏度為雙縮脲方法的100倍左右。有利于檢測較微量的蛋白質(zhì)。但試劑反應(yīng)仍易受多種化合物的干擾。

    2.采用280nm和215/225紫外吸收值,計算蛋白質(zhì)含量 280nm 是由于蛋白質(zhì)分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特異性和準(zhǔn)確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有干擾。紫外區(qū)200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍,將血清稀釋1000-2000倍可以消除干擾物質(zhì)的影響。

    3.采用沉淀反應(yīng)進行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方,此方法甚為簡便,醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理不需特殊儀器,技術(shù)關(guān)鍵在于:①選擇最佳試劑濃度及溫度;②混勻技術(shù);③選用的標(biāo)準(zhǔn);④待測標(biāo)本中的蛋白濃度。

    4.染料結(jié)合法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異結(jié)合,如氨基黑(amino black)與考馬亮藍(lán)(comassive brilliant blue )。這一性質(zhì)除了可以用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色,亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺點是多種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致??捡R亮藍(lán)在與蛋白質(zhì)結(jié)合后的吸收峰從465nm移向595nm,這一性質(zhì)可用分光光度法來定量檢測。

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