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瑞氏染色法：

1.瑞氏染料：

由酸性染料伊紅（E）和堿性染料亞甲藍（M＋）組成。伊紅通常為鈉鹽，有色部分為陰離子。亞甲藍（又稱美藍）為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構。

通常為氯鹽，即氯化美藍，有色部分為陽離子。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料（即天青）。將適量伊紅、美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅；二是固定細胞形態(tài)。

2.染色原理既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質不同，對各種染料的親和力也不一樣。如:

血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質。

細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞胞質為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質。

中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結合，染淡紫紅色，稱為嗜中性物質；原始紅細胞、早幼紅細胞胞質、核仁含較多酸性物質，染成較濃厚的藍色。

中幼紅細胞既含酸性物質，又含堿性物質，染成紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細胞，酸性物質徹底消失后，染成粉紅色。

3.pH值的影響：

細胞各種成分均屬蛋白質，由于蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結合，紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅，細胞核呈淡藍色或不染色。

在偏堿性環(huán)境中負電荷增多，易與美藍結合，所有細胞呈灰藍色，顆粒呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。

稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致細胞染色反應呈色異常，形態(tài)難以識別，甚至錯誤。

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