凝膠內沉淀試驗:單向擴散試驗
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單向擴散試驗:瓊脂內混入抗體,待測抗原從局部向瓊脂內自由擴散,如抗原和相應抗體結合,則形成沉淀環(huán)。
1、試管法:將一定量的抗體混入0.7%瓊脂糖溶液中,注入小試管內,上層加抗原溶液使待測抗原在凝膠中自由擴散,在抗原抗體比例恰當位置形成沉淀環(huán)。
2、平板法:是將抗體或抗血清混入0.9%瓊脂糖內,未凝固前傾注成平板,然后在上打孔,將抗原加入孔中,放37℃讓其自由擴散,24~48h后可見孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán),測定環(huán)的直徑或面積計算標本中待測抗原的濃度。有兩種計算方法:l)Mancini曲線:適用大分子抗原的和長時間擴散(>48h)的結果,沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關系c/d2=k.(其中c為抗原濃度d為沉淀環(huán)直徑k為常數(shù))
3、單向擴散試驗檢測時的注意點:
(1)抗血清必須特異性強、效價高、親和力強,在良好條件下保存。
(2)每次測定都必須作標準曲線。
(3)每次測定時必須用質控血清作質控。
(4)注意雙環(huán)現(xiàn)象(出現(xiàn)了兩種抗原性相同成分)。
(5)應用單克隆抗體測量多態(tài)性抗原時,測定值偏低;用多克隆抗體測量單克隆病時,測定值偏高。
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