組織和細(xì)胞粗抗原的制備是臨床檢驗(yàn)技士考試大綱要求的考點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)做了整理，希望對(duì)大家有幫助。

免疫原多來源于只類及動(dòng)物的組織或細(xì)胞，這些材料在取得可溶性蛋白質(zhì)之前，必須先進(jìn)行處理，以適合于進(jìn)一步純化。

1.組織細(xì)胞抗原的制備所用組織必須是新鮮的或低溫（＜－40℃）保存的。

器官或組織得到后立即去除表面的包膜或結(jié)締組織以及一些大血管。如有條件，臟器應(yīng)進(jìn)行灌注，除去血管內(nèi)殘留的血液。處理好的組織用0.05/NaN3生理鹽水洗去血跡及污染物。將洗凈的組織剪成小塊，進(jìn)行粉碎。粉碎的方法有兩類：①高速組搗碎機(jī)法。操作時(shí)，將組織加鹽水（約1/2）裝入搗碎機(jī)筒內(nèi)，用高速（約1000r/min）間斷進(jìn)行，每次30～60s，時(shí)間過長會(huì)產(chǎn)熱。②研磨法。可用玻璃勻漿器或乳缽研磨。玻璃勻漿器是由一內(nèi)壁經(jīng)過磨砂的玻璃管和一根一端為圓柱狀（表面亦經(jīng)磨砂）的磨桿組成，主要經(jīng)過旋轉(zhuǎn)、壓擠將組織粉粹。研磨法可用于韌性較大型組織，如皮膚、空腔器官等。為了更有效地磨碎組織，有時(shí)在研磨時(shí)加入淘洗過的海砂。組織勻漿通過2000～3000r/min離心10min后分成兩個(gè)部分：沉淀物含有大量的組織細(xì)胞和碎片；上清液作為提取可溶性抗原的材料，提取前還要通過1000～2000r/min20～30min的高速離心，以除去微小的細(xì)胞碎片，此時(shí)上清液應(yīng)澄清。

2.組織細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞可溶性抗原的制備制備抗原用的細(xì)胞包括正常細(xì)胞、病理細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞）或傳代細(xì)胞。組織細(xì)胞的制備一般通過上述機(jī)械破碎后取得?；蛲ㄟ^酶消化，所用的酶大多為胃蛋白酶或胰酶。通過酶解將細(xì)胞間質(zhì)蛋白消化，獲得游離的單個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞抗原一般分為三個(gè)組分：膜蛋白抗原、細(xì)胞漿抗原（主要為細(xì)胞器）和細(xì)胞核及核膜抗原。三種抗原的制備皆需將細(xì)胞破碎，方法有如下幾種。

（1）反復(fù)凍融法：將待破碎的細(xì)胞（有時(shí)為整塊組織）置－20冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后緩慢地融化。如此反復(fù)2次，大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？杀蝗谄?。

（2）冷熱交替法：在細(xì)菌或病毒中提取蛋白質(zhì)及核酸時(shí)可用此法。操作時(shí)，將材料投入沸水浴中，90℃左右維持?jǐn)?shù)分鐘，立即置于冰浴中使之迅速冷卻，絕大部分細(xì)胞被破壞。

（3）超聲破碎法：對(duì)微生物和組織細(xì)胞多用此法。處理效果與樣品濃度和使用頻率有關(guān)。一般組織細(xì)胞皆易破碎，而細(xì)菌，尤其是真菌的厚膜孢子則較難打破。超聲波所使用的頻率從1～20kHz不等。同樣要間歇進(jìn)行，因長時(shí)間超聲也會(huì)產(chǎn)熱，易導(dǎo)致抗原破壞。一次超聲1～2min，總時(shí)間為10～15min.

（4）自溶法：利用組織和微生物的自身酶系，在一定的pH和溫度下，使其細(xì)胞裂解。自溶的溫度，對(duì)動(dòng)物組織細(xì)胞常選0～4℃，而對(duì)微生物常選室溫。自溶時(shí)常需加入少量防腐劑，如甲苯或氯仿等，NaN3不宜使用，因其能抑制酶的活力。

（5）溶菌酶處理法：在堿性條件下（pH8.0），溶菌酶可專一破壞細(xì)菌細(xì)胞壁，適用于多種微生物。除溶菌酶外，蝸牛酶、纖維素酶等也可用于消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。

（6）表面活性劑處理法：常用的有十二烷基吡啶、支氧膽酸鈉等。因效果較差，已少應(yīng)用。

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