染色失敗的幾種原因是醫(yī)學(xué)檢驗士考試可能涉及到的知識點,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編整理了相關(guān)知識點,供考生參考。
(1)所染的全部切片均為陰性結(jié)果:包括陽性對照在內(nèi),全部呈陰性反應(yīng),原因可能是:①染色未嚴(yán)格按操作步驟進(jìn)行;②漏加一種抗體,或抗體失效;③緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉,抑制了酶的活性;④底物中所加H2O2量少或失效;⑤復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)。
(2)所有切片均呈弱陽性反應(yīng):①切片在染色過程中抗體過濃,或干燥了;②緩沖液配制中未加氯化鈉和pH值不準(zhǔn)確,洗滌不徹底;③使用已變色的呈色底物溶液,或呈色反應(yīng)時間過長;④抗體溫育的時間過長;⑤H2O2濃度過高,呈色速度過快;⑥粘附劑太厚。
(3)所有切片背景過深;①未用酶消化處理切片;②切片或涂片過厚;③漂洗不夠;④底物呈色反應(yīng)過久;⑤蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血;⑥使用全血清抗體稀釋不夠。
(4)陽性對照染色良好,檢測的陽性標(biāo)本呈陰性反應(yīng),醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理固定和處理不當(dāng)是最常見的原因。
對于陽性結(jié)果的定量判斷常規(guī)方法是根據(jù)呈色深淺和陽性細(xì)胞數(shù)量分類計數(shù),以(-)、+、++、+++等分級和計數(shù)統(tǒng)計。現(xiàn)在已采用圖象分析計量,本書第九章 將詳細(xì)敘述這種使免疫細(xì)胞化學(xué)的定量成為可能的先進(jìn)的形態(tài)定量方法。另外,第十章 將詳細(xì)途述另一種先進(jìn)的免疫細(xì)胞化學(xué)計量分類術(shù)-流式細(xì)胞光度計技術(shù)。