中藥化學(xué)結(jié)構(gòu)測定:
成分特別是有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定(測定)是中藥成分研究的重要步驟。如果不能鑒定結(jié)構(gòu),說明研究成分沒有結(jié)果,更談不上更進一步的研究,如藥代動力學(xué)研究、結(jié)構(gòu)改造等。
要進行成分結(jié)構(gòu)鑒定,首先要保證樣品的純度,如果被測樣品達不到一定純度,則無法鑒定結(jié)構(gòu)式。鑒定結(jié)構(gòu)式采用的方法有化學(xué)法(利用化學(xué)反應(yīng)等)、波譜法等。波譜法是非常準確的先進方法,包括紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)、核磁共振法(H-NMR、C-NMR)、質(zhì)譜法(MS)等。
如果被測成分是已知化合物,在確定純度后,不必作很多鑒定工作,選擇其中幾種即可醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)`搜集整理。如果能得到已知物的標準品或?qū)φ掌?,將被測定成分和標準品進行色譜分析(TLC或HPLC),Rf值或保留時間一致,混熔點不下降,紅外光譜完全一致,分子量一致,就可說明被測成分和對照品一致。如果得不到標準品,則和文獻中已知物的紅外光譜(最好是已知物圖譜)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行對照,有時還需和已知物的NMR譜數(shù)據(jù)進行對照,如果一致則說明被測成分和文獻報道成分一致。
如果被測成分為未知物,則要作很多工作。對未知成分的結(jié)構(gòu)測定,也要注意文獻工作,注意該中藥的來源,注意同種屬植物中化學(xué)成分的研究情況,收集信息,對結(jié)構(gòu)鑒定很有益處。未知物的鑒定基本有二種情況,一種是全新結(jié)構(gòu)的化合物,一種是基本骨架已知,而只是取代基種類不同或位置不同,對后一種情況,收集文獻資料對鑒定結(jié)構(gòu)非常有用。
對一個化合物,一般按下列步驟進行鑒定:
?。?)首先觀察外形、顏色是否單一純正,晶形是否一致。
?。?)色譜分析:薄層色譜結(jié)果為單一斑點,應(yīng)注意點樣量不可太小,展開劑不可只選一種。有時可用氣相色譜和高效液相色譜法,結(jié)果為單一色譜峰。
?。?)熔點測定:熔點距一般應(yīng)小于2℃。
物理常數(shù)固體樣品包括熔點、比旋度等;液體樣品包括沸點、折光率、比旋度等。
采用高分辨質(zhì)譜法得到分子離子峰,可直接得出分子式。如無高分辨質(zhì)譜則可先測出分子量(一般用質(zhì)譜),再進行元素分析測出所含元素及百分含量,求出實驗式,最后計算出分子式,實驗值與理論值應(yīng)非常接近醫(yī)^學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
采用的方法有計算不飽和度、化學(xué)反應(yīng)、IR光譜、UV光譜、NMR譜、MS數(shù)據(jù),綜合分析,有時與已知物進行比較,以確定被測樣品的基本骨架與功能團(取代基)。
通過綜合分析所有波譜數(shù)據(jù),必要時要作一些特殊的測試,如NMR中的一些新方法,甚至作Ⅹ射線衍射等測試,確定化學(xué)結(jié)構(gòu)式。如果有可能,進行人工合成,將從中藥中提取分離所得樣品與人工合成品進行全面比較來證明結(jié)構(gòu)式的正確性。