淋巴細(xì)胞分離|檢測(cè)技術(shù)介紹：

1.免疫熒光法

常用間接法檢查淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志，鑒定細(xì)胞的群、亞群。如CD³⁺、CD⁴⁺、CD⁸⁺、mIg等。

2.流式細(xì)胞術(shù)

是借助流式細(xì)胞儀對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行快速準(zhǔn)確鑒定和分類的技術(shù)醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

3.磁珠分離法

磁珠分離法是利用免疫磁珠進(jìn)行分離細(xì)胞的方法。免疫磁珠（IMB）是特異性抗體與磁性微粒的交聯(lián)物。IMB可通過(guò)磁珠上的特異性抗體識(shí)別并結(jié)合表達(dá)相應(yīng)膜抗原的細(xì)胞。應(yīng)用磁場(chǎng)，可分離結(jié)合IMB的細(xì)胞。如采用抗CD3特異性抗體IMB可分離T淋巴細(xì)胞。

4.T細(xì)胞的功能測(cè)定技術(shù)

（1）T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：在體外培養(yǎng)的條件下，人T淋巴細(xì)胞受特異性抗原（如結(jié)核菌素）或非特異性有絲分裂原如植物血凝素（PHA）的刺激后可發(fā)生增生，轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。以3H-胸腺嘧啶參人試驗(yàn)可測(cè)定淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的程度。細(xì)胞免疫功能低下的人，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低。刀豆蛋白A（ConA）是小鼠T細(xì)胞的非特異性有絲分裂原。

（2）混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：器官移植前應(yīng)取受體與供體的淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)以挑選合適的供體?；旌狭馨图?xì)胞培養(yǎng)分雙向法和單向法。

雙向法：將兩個(gè)人體的淋巴細(xì)胞混合在一起培養(yǎng)，若二者的HLA分子不同，兩個(gè)來(lái)源的淋巴細(xì)胞都會(huì)受到刺激而發(fā)生轉(zhuǎn)化。根據(jù)轉(zhuǎn)化的程度可判定兩個(gè)個(gè)體淋巴細(xì)胞HLA分子的相異的程度。單卵雙生子間的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)后不發(fā)生轉(zhuǎn)化。

單向法：將一個(gè)個(gè)體的淋巴細(xì)胞用絲裂霉素或放射處理使之失去自身的轉(zhuǎn)化能力，但保留著抗原性。用這種淋巴細(xì)胞的未經(jīng)處理的另一個(gè)個(gè)體的淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)。根據(jù)未經(jīng)處理的淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化程度來(lái)判定兩個(gè)個(gè)體淋巴細(xì)胞HLA分子的相差的程度?；旌狭馨图?xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞均可發(fā)生轉(zhuǎn)化。

（3）遲發(fā)超敏反應(yīng)皮試：將已知量的抗原（如結(jié)核菌純化蛋白衍生物）注射入前臂皮內(nèi)，24～48小時(shí)后測(cè)定硬結(jié)大小，硬結(jié)直徑大于10mm即被視為陽(yáng)性。皮試陰性的人，可能有細(xì)胞免疫功能低下也可能未接觸過(guò)相應(yīng)的抗原。

（4）細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)：用效應(yīng)性CTL和51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞相互作用。被殺傷的靶細(xì)胞可釋放51Cro測(cè)定靶細(xì)胞釋放的51Cr產(chǎn)生的放射性，就可判定效應(yīng)細(xì)胞應(yīng)性CTL的細(xì)胞毒活性。用類似的方法也可測(cè)定NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。

5.B淋巴細(xì)胞功能的檢測(cè)

（1）B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：將人淋巴細(xì)胞和不溶性的金黃葡萄球菌（B淋巴細(xì)胞分裂原）一起培養(yǎng)，以3H-胸腺嘧啶參入試驗(yàn)可測(cè)定發(fā)生B淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的程度。細(xì)菌脂多糖是小鼠的B細(xì)胞分裂原。

（2）抗體生成細(xì)胞的測(cè)定：常用溶血空斑試驗(yàn)。在此實(shí)驗(yàn)中，抗體生成細(xì)胞分泌的Ig與綿羊紅細(xì)胞（SRBC）表面的抗原結(jié)合，在補(bǔ)體參與下出現(xiàn)溶血反應(yīng)。方法是將吸附有已知抗原的SRBC、待檢的B細(xì)胞、補(bǔ)體及適量瓊脂糖液混合，傾注平皿，溫育1～3小時(shí)后，肉眼可見(jiàn)分散的溶血空斑，每一空斑中央含一個(gè)抗體形成細(xì)胞，空斑數(shù)目即為抗體形成細(xì)胞數(shù)。