經(jīng)典的溶血斑試驗(yàn)用于檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體形成細(xì)胞的功能，其原理是將綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾細(xì)胞，加入SRBC及補(bǔ)體，混合在溫?zé)岬沫傊芤褐?，澆在平皿?nèi)或玻片上，使成一蒲層，置37℃溫育。由于脾細(xì)胞內(nèi)的抗體生成細(xì)胞可釋放抗SRBC抗體，使其周圍的SRBC致敏，在補(bǔ)體參與下導(dǎo)致SRBC溶血，形成一個(gè)肉眼可見的圓形透明溶血區(qū)而成為溶血空斑（plaque）。每一個(gè)空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞，空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少。這種直接法所測的細(xì)胞為IgM生成細(xì)胞，其他類型Ig由于溶血效應(yīng)較低，不能直接檢測，可用間接檢測法，即在小鼠脾細(xì)胞和SRBC混合時(shí)，再加抗鼠Ig抗體（如兔抗鼠Ig），使抗體生成細(xì)胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物，此時(shí)能活化補(bǔ)體導(dǎo)致溶血，稱間接空斑試驗(yàn)。但是上述直接和間接空醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理斑形成試驗(yàn)都只能檢測抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞，而且需要事先免疫，難以檢測人類的抗體產(chǎn)生情況。如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被，則可檢查與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，這種非紅細(xì)胞抗體溶血空斑試驗(yàn)稱為空斑形成試驗(yàn)，它的應(yīng)用范圍較大。

　　現(xiàn)在常用的為SPA-SRBC溶血空斑試驗(yàn)。SBA能與人及多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc段呈非特異性結(jié)合，利用這一特征，首先將SPA包被SRBC，然后進(jìn)行溶血空斑測定，可提高敏感度和應(yīng)用范圍。在該測試系統(tǒng)中，加入抗人Ig抗體，可與受檢細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，復(fù)合物上的Fc段可與連接在SRBC上的SPA結(jié)合，同時(shí)激活補(bǔ)體，使SRBC溶解形成空斑。此法可用于檢測人類外周血中的IgG產(chǎn)生細(xì)胞，與抗體的特異性無關(guān)。用抗IgA、IgG或IgM抗體包被SRBC，可測定相應(yīng)免疫球蛋白的產(chǎn)生細(xì)胞，這種試驗(yàn)稱為反相空斑形成試驗(yàn)。