一、移植物選擇標準

　　移植物選擇是移植能否成功的關鍵因素之一，選擇的標準可歸納為以下幾類：

　　1.一般情況①移植物本身必須是健康細胞、組織或器官，在形態(tài)和功能上都沒有異常發(fā)現；②供者無傳染?。ㄓ绕涫?a href="http://thedailypurge.net/jibing/aizibing/" target="_blank" title="艾滋病" class="hotLink">艾滋病和肝炎等）或相關感染、無代謝病和惡性腫瘤（原發(fā)性腦腫瘤除外），全身重要器官的功能正常；③供者與受者的年齡應相仿，尤其供者應小于受者；但在生命器官移植時，供者年齡最好在10～50歲之間；④供者器官與受區(qū)的大小應相接近，尤在心、肝、肺等原位移植中，供者與受者體重相差不能過于懸殊，否則就植入困難或者不適應。

　　2.ABO血型相容一般臨床輸血的ABO選配原則也適用于移植，O型受者只接受O型移植物；A型受者接受A型或O型；B型受者接受B型或O型；AB型受者接受范圍較廣。一般情況下，不管是活體移植物還是尸體移植物，血型不相容就不應該進行移植。

　　3.HLA相容性供者與受者之間HLA相同的位點越多，相容性就越好，長期存活的可能性就越大。但是臨床移植的絕大多數是同種移植，在非直系血緣關系的人群中，幾乎不可能發(fā)現HLA完全相同者；只要能發(fā)現1～2個HLA位點相同，就比HLA完全不相同者之間的移植成功率大得多。如果有可能，移植物的供者最好是近親（例如父母、子女或同胞兄弟姊妹等）的健康志愿者，這樣可以在移植前對雙方較全面的檢測和交叉配合試驗，還可能有選擇的余地。如果等待尸體器官，檢測HLA的困難性增加，選擇的機會也少。移植中心的建立可以解決好多難題。

　　二、HLA血清學定型試驗

　　HLA-A、B、C、DR或DQ位點的抗原可用血清方法進行檢測，所以稱為SD抗原（serologicallydefinedantigen），其檢測方法目前普遍采用補體依賴的細胞毒（complementdependentcytotoxicyty，CDC）試驗。

　　1.試驗方法美國國家衛(wèi)生研究院（NIH）的標準方法如下：將一系列已知特異性的標準分型血清（1μl/孔）按設計好的方案加到72孔或60孔專用反應板中（如暫時不用可以冰凍保存）；加入待檢淋巴細胞2000個/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結合；加入補體（多為家兔混合血清）5μl，置室溫60min；每孔加入5％伊紅2～3μl，使死細胞著色；3～5min后每孔加12％福爾馬林8μl固定細胞；待細胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結果。某孔的著色細胞超過50個即為陽性反應，說明被檢細胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致；否則為不一致。

　　2.細胞分離檢測活體可取外周血直接分離；檢測尸體時取淋巴結，制成單個細胞并洗滌后再分離。檢測HLAⅠ類抗原時取單個核細胞層的細胞即可應用，因為該層細胞都表達Ⅰ類抗原；但檢測HLA-DR和DQ等Ⅱ類抗原時，就需要進一步分離較純的B細胞（純度達80％以上），因為Ⅱ類抗原不分布在T細胞上。

　　3.分型血清試驗用的標準抗血清必須從經產婦（尤其多產婦）的血清中篩選，胎盤液或其他體液也可應用；也可通過人工免疫獻血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗，只是將已知與待檢互換。Ⅱ類抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類抗體吸收去，因試驗用的B細胞上也有Ⅰ類抗原。許多人嘗試過抗HLA的單克隆抗體，但是多不成功，因鼠源性抗體主要是針對人類的公共抗原而非某個體的HLA私有抗原；還有一個原因是鼠源性抗體多不能固定補體，不能用細胞毒方法進行檢測。

　　4.HLA定型板某些專門實驗室將HLA定型血清預先加到專用的反應板上冰凍保存，可供自己或出售給他人使用，試驗時只須加入待檢細胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類要覆蓋本民族或本地區(qū)80％以上的抗原，其中高頻抗原每種抗血清3份以上，低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經幾個實驗室認可或有關部門核準后才能銷售和使用；現在國內所做的定型板多限于HLAⅠ類抗原的檢測。

　　三、HLA細胞法分型試驗

　　HLA-D和DP位點的抗原須用細胞法分型進行鑒定，所以又稱LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鑒定方法普遍采用混合淋巴細胞培養(yǎng)（mixedlymphocyteculture，MLC），也稱混合淋巴細胞反應（mixedlymphocytereaction，MLR）。

　　1.試驗方法將分離的反應細胞（通常是患者的淋巴細胞）與刺激細胞（通常是供者或已知的標準淋巴細胞）配制成1×106/ml濃度的懸液，各加0.2ml到反應管中；放置37℃和5％CO2環(huán)境下培養(yǎng)5～6天。培養(yǎng)結束后進行涂片染色，觀察并計數轉化的淋巴細胞；也可在培養(yǎng)結束前5～12小時加入3H-TdR，收獲后用液體閃爍儀計數細胞的放射性。試驗結果的常用表示方式是刺激指數（SI）。

　　MLC分為雙向法和單向法。雙向MLC是反應管中兩種細胞都有應答能力，可以互為刺激細胞和反應細胞，試驗結果是兩種細胞反應之和。

　　SI＝2×試驗管cpm/（A對照cpm＋B對照cpm）

　　雙向MLC只能反映兩種細胞間LD的差別，結果比較模糊，也不能做LD抗原的分型。單向MLC是將刺激細胞用絲裂霉素C（mitomycinC）或X線照射先行滅活，但細胞的抗原性保持不變，因此可作為刺激細胞而不能作為反應細胞，試驗結果是待檢測細胞的反應，使于結果分析。

　　SI＝試驗管cpm/自身對照cpm

　　單向MLC可以用來進行HLD-D和DP位點的分型試驗，常用的方法有兩類：純合子分型細胞（homozygoustypingcell，HTC）試驗和預敏淋巴細胞分型（primedlymphocytetyping，PLT）試驗。

　　2.HTC試驗HTC是指細胞內一對同源染色體上兩個HLA單倍型完全相同，所以該位點在細胞表面只表達一種抗原；HTC可從近親婚配的子代表中尋找。將一組HTC經處理來活后作為刺激細胞，與待檢細胞做單向MLC.如果待檢細胞與刺激細胞的LD不同，就會發(fā)生反應；如果相同便不反應；所以試驗又稱為陰性分型法。當SI≤2時可認為待檢細胞與該管HTC的LD抗原相同。本法的缺點是HTC難以得到，而且培養(yǎng)時間長（5～6天），在尸體器官移植時不能應用。

　　3.PLT試驗本方法需事先準備分型細胞：選擇只有一個單倍型相同的兩個體a/b和a/c（這在雙親與子女之間不難做到），取前者的淋巴細胞處理后作刺激細胞，取后者的淋巴細胞作反應細胞；將兩者進行單向混合培養(yǎng)，至第10天使可得到針對b單倍型有特異性免疫應答能力的預致敏分型細胞（PTL）。依此類推，可以制備出一系列能識別各種已知LD抗原的一套PTL；這些處于休止狀態(tài)的致敏記憶細胞可在液氮中長期保存?zhèn)溆谩?/p>

　　進行PLT試驗時，需將待檢淋巴細胞處理成刺激細胞，而PTL為反應細胞；如果待檢細胞的LD抗原與PTL預先識別的特異性相同，則PTL會迅速出現反應（二次應答），如不同則不出現快速反應，所以本法又稱為陽性分型法。PLT法克服了HTC法試驗周期長的缺點，在24小時內即可報出結果；PTL比HTC容易得到，但真正做起來也復雜。

　　不管是CDC試驗還是MIC方法，都必須以受檢者的淋巴細胞作為檢測標本，這就大大地限制了檢測方法的應用范圍；而且還存在抗體來源困難、細胞培養(yǎng)周期過長等缺點；所以近年來將分子生物學技術引入了HLA檢測的領域，產生了DNA分型法。DNA分型法是利用PCR技術將標本中的少量目的DNA大量擴增，然后再進行產物鑒定的方法（原理和步驟在此不予討論），特點是靈敏度高，試劑來源容易，應用范圍廣，陳舊的或微量的標本都可進行檢測，在移植醫(yī)學、法醫(yī)學和其他方面都有廣闊的前途。

　　四、交叉配合試驗

　　傳統的交叉配合（crossmatching）試驗是檢測受者體內是否存在抗供者的特異性抗體，現在可同時檢測受者對供者LD抗原的相容程度。不管是否已經進行過各種HLA分型試驗，交叉配合試驗對選擇移植物都有一定的參考價值。

　　1.微量細胞毒試驗用供者的淋巴細胞作靶細胞，與受者的血清進行CDC；出現陽性反應說明受者體內含有抗供者的特異性抗體，移植后很有可能發(fā)生超急排斥反應。若要明確受者的抗體是抗Ⅰ類抗原還是抗Ⅱ類抗原，可以將供者的淋巴細胞進一步分離出較純的T細胞和B細胞分別進行檢測；若要排除患者自身抗體的影響，可以用患者自己的細胞與自已的血清進行試驗作為對照。

　　交叉配合是移值前必須做的一個檢驗項目；對一些曾經接觸過移植抗原的受者，例如多次接受輸血者、經產婦、有不成功移植史或接受過血清透析治療者，尤其要進行審慎的檢驗。

　　2.流式細胞儀檢測將供者淋巴細胞與受者血清共育后，用熒光標記的抗人Ig對結合有抗體的細胞染色，在流式細胞儀上進行熒光標記測定。該法比微量細胞毒法的靈敏度高100倍，有條件的單位可以優(yōu)先考慮使用。

　　3.混合淋巴細胞培養(yǎng)將供者與受者的淋巴細胞做雙向混合培養(yǎng)，或者滅活供者的淋巴細胞做向混合培養(yǎng)，細胞反應的程度與供－受者相容的程度呈負相關。

　　4.細胞介導的淋巴細胞毒試驗檢測受者對移植物可能發(fā)生的細胞介導的淋巴細胞毒作用（cell-mediatedlymphocytotoxicity，CML）。將受者淋巴細胞與滅活的供者淋巴細胞做常規(guī)單向MLC，收獲致敏的受者淋巴細胞后，再與51Cr標記的、PHA刺激的供者淋巴細胞做CML試驗；51Cr釋放的程度與供－受者相容程度呈負相關。