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    酶活性測定方法

    2009-09-04 09:47 來源:
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      1.按反應(yīng)時(shí)間分類法:

      20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時(shí)間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來計(jì)算酶的活性,現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法。這種方法用自動生化分析儀上完成,可以測酶反應(yīng)的初速度,其結(jié)果遠(yuǎn)比固定時(shí)間法準(zhǔn)確,在高濃度標(biāo)本尤為明顯,但本法也受到反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)溫度,試劑等的影響,應(yīng)加以注意。

      (1)定時(shí)法:(兩點(diǎn)法)

      通過測定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時(shí)間。

      酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間,通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理沉淀劑等,使反應(yīng)完全停止(也叫中止反應(yīng)法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。

      該法最基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。

      優(yōu)點(diǎn):簡單易行,對試劑要求不高。

      缺點(diǎn):難保證測定結(jié)果的真實(shí)性。

      難以確定反應(yīng)時(shí)間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時(shí)間的延續(xù),酶變性失活加速。

     ?。?)連續(xù)監(jiān)測法:又稱為動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。

      在酶反應(yīng)過程中,用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。

      連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù),可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計(jì)算酶活力。

      因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時(shí)法更準(zhǔn)確。

      實(shí)際工作中,采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理應(yīng)用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。

     ?。?)平衡法:通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點(diǎn)法。

      2.按檢測方法分類法:

     ?、俜止夤舛确ǎ虎谛夥?;③熒光法;④電化學(xué)方法;⑤化學(xué)反應(yīng)法;⑥核素測定法;⑦量熱法。

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