熒光抗體技術(shù)是初級檢驗(yàn)技師考試大綱所包含的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家學(xué)習(xí)參考。
?。?)熒光抗體的制備和鑒定:
①抗體熒光素標(biāo)記:用于標(biāo)記抗體,要求是高特異性和高親和力的。作為標(biāo)記的熒光素應(yīng)符合以下要求:
1)應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價鍵的化學(xué)基團(tuán),與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離,而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。2)熒光效率高,與蛋白質(zhì)結(jié)合后,仍能保持較高的熒光效率。3)熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明。4)與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)。5)標(biāo)記方法簡單、安全無毒。6)與蛋白質(zhì)的結(jié)合穩(wěn)定,易于保存。常用的標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法有攪拌法和透析法兩種。
?、跓晒饪贵w的鑒定:包括效價及熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率??贵w效價可以用瓊脂雙擴(kuò)散法進(jìn)行滴定,效價大于1:16者較為理想。熒光素與蛋白質(zhì)結(jié)合比率(F/P)來計(jì)算。F/P值越高,說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多,反之則越少。一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P=1.5為宜,用于活細(xì)胞染色的以F/P=2.4為宜。
(2)免疫熒光顯微技術(shù):是使熒光抗體與標(biāo)本切片中組織或細(xì)胞表面的抗原進(jìn)行反應(yīng),洗滌除去游離的熒光抗體后,于熒光顯微鏡下觀察,在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。
?、贅?biāo)本的制作:主要靠觀察切片標(biāo)本上熒光抗體的染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位。
②熒光抗體染色:滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體進(jìn)行染色。
?、蹮晒怙@微鏡檢查:最好在染色當(dāng)天即作鏡檢,以防熒光消退,影響結(jié)果。
④實(shí)驗(yàn)的類型:包括直接法、間接法、補(bǔ)體結(jié)合法和雙標(biāo)記法。
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