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直播時間:已結(jié)束
主講老師:賈老師
直播介紹:相關(guān)專業(yè)知識心血管系統(tǒng)內(nèi)容復(fù)習(xí)方向、考點講解及得分技巧
(一)周圍血象 白細(xì)胞計數(shù)大多正常,在某些腸道病毒感染時可增高,中性粒細(xì)胞也可增多。
(二)病毒分離 一般都采取咽拭及糞便作病毒分離和檢定,尚可從病人的腦脊液、胸水、心包積液、血液、皰漿以及活檢或尸檢取得的組織中分離到病毒。標(biāo)本取得后,應(yīng)立即送檢。可接種于猴腎、人胚腎、人羊膜、人二倍體或Hela細(xì)胞、KB傳代細(xì)胞中進行組織培養(yǎng),觀察細(xì)胞病變。同時用多種組織培養(yǎng)細(xì)胞進行分離可提高陽性率。陽性標(biāo)本再以特異型的免疫血清作中和試驗進行型別鑒定。疑有柯薩奇A組病毒感染者,應(yīng)將標(biāo)本經(jīng)皮下、腹腔內(nèi)或腦內(nèi)途徑接種乳鼠進行病毒分離,因其組織培養(yǎng)陽性率不高。柯薩奇B組病毒亦可使乳鼠致病。
(三)血清免疫學(xué)試驗 采取雙份血清,測定型特異抗體水平。一般可用中和試驗、補體結(jié)合試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA,酶標(biāo)法)、放射免疫等法進行測定,其中以中和試驗最為可靠,中和抗體消失最慢,型特異性也較強。醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理如恢復(fù)期抗體水平比早期有≥4倍上升,則有極大的診斷意義。但因腸道病毒型別眾多,血清學(xué)中和試驗工作量大,只有當(dāng)某地一已知型腸道病毒流行時,以此法進行診斷比較理想。
(四)免疫熒光快速診斷法 以熒光染色的免疫抗體來鑒定抗原可達到快速診斷的目的。但目前除在脊髓灰質(zhì)炎病毒感染時應(yīng)用外,在腸道病毒感染時采用不多,因需備各種型特異的免疫血清,手續(xù)繁多。最近采用許多血清型共有的VP3-ZC抗原和一種與多血清型的VP1衣殼蛋白交叉反應(yīng)的單克隆抗體,改進了免疫診斷方法,但目前仍停留于研究階段。
(五)核酸雜交法 由于不同血清型的腸道病毒基因組間存在同源性,特別是5′端非編碼區(qū)部分區(qū)域高度保守,故可供核酸雜交,使近年來對腸道病毒鑒定有了新的飛躍。采用探針有以下三種:①cDNA探針,以病毒RNA某一片段為模板,由逆轉(zhuǎn)錄酶催化產(chǎn)生,醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理大多克隆在質(zhì)粒載體中,再把帶有顯色基因(生物素或地高辛)或同位素的核苷酸摻入到新合成的cDNA鏈中去,加以標(biāo)記,若將標(biāo)本先經(jīng)12~24小時組織培養(yǎng)可提高陽性率。②RNA探針-由于RNA是單鏈分子,故它與靶序列的雜交反應(yīng)效率極高,一般用特異的轉(zhuǎn)錄載體克隆腸道病毒RNA探針,混合幾種RNA探針可使檢測病毒型更廣,RNA探針在特異性和敏感性方面都優(yōu)于cDNA探針。③寡核苷酸探針,較上述二種探針有下面優(yōu)點。因其鏈短,與等量靶位點完全雜交時間短,且可識別靶序列內(nèi)一個堿基的變化,可檢測點突變,又可大量合成,價廉。此探針因選擇5′端非編碼區(qū)共同序列,故可牢固而特異地同大多數(shù)臨床常見腸道病毒結(jié)合。為了克服標(biāo)本中腸道病毒滴度太低的問題,近年采用PCR法將單一基因或短DNA序列放大,再與探針雜交,此法已應(yīng)用于臨床。在腸道病毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染流行時,從腦脊液中檢測腸道病毒RNA,陽性率高,可在24小時內(nèi)得結(jié)果,比病毒培養(yǎng)平均需6~8天快得多。臨床標(biāo)本用PCR擴增后,再與非同位素標(biāo)記腸道病毒探針雜交,數(shù)小時即有結(jié)果,大大有助于臨床確診。需6~8天快得多。臨床標(biāo)本用PCR擴增后,再與非同位素標(biāo)記腸道病毒探針雜交,數(shù)小時即有結(jié)果,大大有助于臨床確診。
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