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    招生方案

    常用HE染色試劑配制方法

    2013-11-15 13:48 來源:
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    常用HE染色試劑配制方法是檢驗(yàn)技師需要了解的知識(shí),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜索整理如下:

    蘇木精—伊紅染色法(hematoxylin-eosinstaining),簡稱HE染色法,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。

    一、蘇木素

    (1)Harris蘇木素液

    配方:labdd.com

    蘇木精1g;無水乙醇10ml;蒸餾水200ml;鉀明礬20g;HgO0.5g

    先將蘇木精溶于無水乙醇中,備用。把明礬放入蒸餾水,加熱溶解,再加入備用的蘇木精,煮沸2分鐘,先加入極少量的氧化汞(紅色、黃色均可),防止氧化過程中液體劇烈沸騰外溢(最好選用比配制容積大一倍燒杯,燒杯比三角燒瓶更不容易外溢),玻棒攪拌,然后,邊攪拌邊加入氧化汞。一定要注意開始時(shí)只能一點(diǎn)點(diǎn)加,直到液體不再劇烈沸騰了,才能增加加入的量,直至加完。加入氧化汞所用的時(shí)間和氧化汞溶解的程度、電爐的功率是此配方的關(guān)鍵,也是各人配出來染色效果各不相同的原因,具體要根據(jù)每人的習(xí)慣進(jìn)行調(diào)整,同時(shí)也要根據(jù)氣溫而適當(dāng)改變加熱的時(shí)間,加熱時(shí)間越長,氧化越快。加完后,立即移至冰水中,加速其冷卻,靜置一夜后,過濾。用前以5%的比例加入冰乙酸。如配好后時(shí)間較長,冰乙酸的量可適當(dāng)多加一點(diǎn)。冰乙酸的量,可直接影響蘇木素的著色能力和清晰度。加少了,會(huì)造成核漿共染,背景不干凈;加多了,核著色能力下降。此液可放置3月至半年左右。

    (2)Gill改良蘇木素液:

    蘇木精2g;無水乙醇250ml;硫酸鋁17.6g;蒸餾水750ml;碘酸鈉0.2g;冰乙酸20ml

    先將蘇木精溶于無水乙醇,硫酸鋁溶于蒸餾水,然后兩液混合后加入碘酸鈉,最后加入冰乙酸。此液為半氧化進(jìn)行性蘇木素液,不會(huì)產(chǎn)生沉淀,氧化膜少,從理論上說染色不需要分化,但如果適當(dāng)深染分化,染色效果更好。

    配制此染液的關(guān)鍵在于碘酸鈉的量。一、要根據(jù)季節(jié)氣溫的改變,適當(dāng)調(diào)整碘酸鈉的量,配方里碘酸鈉的量一般只適用于夏天(室溫25度),隨著氣溫降低,氧化速度降低,可適當(dāng)增加碘酸鈉的量,室溫每下降1度,碘酸鈉增加0.01,最多不能超過總量的50%,過量的碘酸鈉可使蘇木素過氧化,不僅容易壞,而且核漿共染。二、稱量一定要準(zhǔn)確,很多單位配此染液總是染不上或染的很慢,主要是天平的精確度差,最好選擇最小稱量度在10mg以下的天平。三、應(yīng)該觀察碘酸鈉是否在有效期內(nèi),是否潮解。

    (3)Ehrlich蘇木素液:

    蘇木精2g;無水乙醇100ml;甘油100ml;冰乙酸10ml;鉀明礬2-3g;蒸餾水100ml

    先將蘇木精溶于無水乙醇,加甘油和冰乙酸待用。然后把鉀明礬溶于蒸餾水,再注入待用的蘇木精液,用玻棒攪勻,輕蓋瓶口(可用棉花),置于日光下,經(jīng)常開啟瓶口并搖勻,約二個(gè)月后,顏色變褐色即可使用。

    (4)Mayer改良蘇木素液:

    蘇木精2g;無水乙醇40ml;硫酸鋁鉀100g;蒸餾水600ml;碘酸鈉0.4g;冰醋酸20ml

    稍加熱將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中,同時(shí)將蘇木精溶無水乙醇,再將二液混合,加入碘酸鈉,充分溶解。此液也是進(jìn)行性蘇木素液,從理論上說染色不需要分化,但如果適當(dāng)深染分化,染色效果更好。注意事項(xiàng)與Gill改良蘇木素液相同。

    二、伊紅

    (1)曙紅(水溶性)

    配方:曙紅(水溶性)2.5g;蒸餾水500ml

    水溶性依紅酸化配制:

    將曙紅溶于蒸餾水中,然后加濃鹽酸10毫升,充分?jǐn)嚢瑁o置過夜后過濾。過濾后的沉淀用蒸餾水沖洗二次,再過濾;將沉淀物連同濾紙一起放入溫箱內(nèi)干燥,加95%乙醇1000毫升,配成飽和液。使用前再用95%的乙醇1:1~2倍稀釋,加入1~2%冰乙酸。

    (2)伊紅(醇溶性)

    配方:伊紅(醇溶性);2.5g95%乙醇;1000ml

    最后加入冰乙酸幾滴,起到促染作用。目前,國內(nèi)依紅偏酸,不僅不需要加冰醋酸,而且根據(jù)胞漿的等電點(diǎn)為pH4.7-5.0,應(yīng)該用當(dāng)量NaOH或冰醋酸將依紅染液調(diào)至pH4.5左右。

    三、鹽酸乙醇分化液:

    濃鹽酸0.5~1ml;75%乙醇99ml

    四、清洗液:

    30%鹽酸或者用5%苯酚水溶液浸泡24小時(shí),取出后充分水洗。此法可用于蓋玻片或載玻片處理。

    五、當(dāng)量鹽酸:

    配制1N的HCL1000ml,需濃HCL多少ml?82.8ml

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