發(fā)熱伴血小板減少綜合征實驗室檢測方案

為保證及時、科學(xué)地采集、運(yùn)送發(fā)熱伴血小板減少綜合征病例（包括疑似病例標(biāo)本），規(guī)范發(fā)熱伴血小板減少綜合征的實驗室檢測程序，提高檢測質(zhì)量，特制定本方案。

一、樣本采集對象

發(fā)熱伴血小板減少綜合征病例（包括疑似病例，以下同）。

二、標(biāo)本種類及采集方法

（一）血清標(biāo)本。用無菌真空管，采集患者急性期（發(fā)病2周內(nèi)）和恢復(fù)期（發(fā)病4周左右）非抗凝血5ml，及時分離血清，分裝保存于帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈的凍存管內(nèi)，標(biāo)記清楚后將血清保存于-70℃冰箱（一周內(nèi)可保存在-20℃冰箱），用于病毒特異性核酸、抗原和抗體檢測及病原體分離。

編碼規(guī)則：“年份（2位）-鄉(xiāng)鎮(zhèn)級地區(qū)編碼（8位）-流水號（3位）”。地區(qū)編碼可通過中國疾病預(yù)防控制中心網(wǎng)絡(luò)直報系統(tǒng)查詢醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)整理。如2010年云南省昆明市五華區(qū)沙朗鄉(xiāng)的第12位調(diào)查者的編碼為“10-53010220-012”。該調(diào)查者的急性期和恢復(fù)期血清分別在編號首位增加“J”和“H”。如上例調(diào)查者的急性期血清編號為J10-53010220-012，恢復(fù)期血清編號為H10-53010220-012.

（二）必要時，可采集病例的活檢或尸檢標(biāo)本進(jìn)行實驗室檢測。具體方法參照病理實驗室相關(guān)要求和衛(wèi)生部《傳染病人或疑似傳染病人尸體解剖查驗規(guī)定》。

三、實驗室檢測和診斷

（一）病原學(xué)。1.核酸檢測：采用RT-PCR和Real-timePCR病毒核酸診斷方法進(jìn)行檢測和診斷，患者血清中擴(kuò)增到特異性核酸，可確診新型布尼亞病毒感染。

2.病毒分離：用于病毒分離的患者急性期血清標(biāo)本經(jīng)處理后，可采用Vero、VeroE6等細(xì)胞或其他敏感細(xì)胞進(jìn)行，用Real-timePCR病毒核酸診斷方法、ELISA、免疫熒光等方法確定。患者血清中分離到病毒可確診。

（二）血清學(xué)。1.血清特異性IgG抗體：采用ELISA、免疫熒光（IFA）抗體測定、中和試驗等方法檢測，新型布尼亞病毒IgG抗體陽轉(zhuǎn)或恢復(fù)期滴度較急性期4倍以上增高者，可確認(rèn)為新近感染。

2.血清特異性總抗體：可采用雙抗原夾心ELISA法檢測，血清病原特異性總抗體陽性表明曾受到病毒感染。

四、生物安全

生物安全按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》等相關(guān)規(guī)定要求，做好生物安全工作。

（一）實驗室生物安全。加強(qiáng)實驗室生物安全，應(yīng)當(dāng)在生物安全Ⅱ級及以上的實驗室開展標(biāo)本的血清學(xué)、核酸檢測和病毒分離工作。

（二）標(biāo)本采集個人防護(hù)。采集病人標(biāo)本時可進(jìn)行一般性防護(hù)（穿戴口罩、手套和長袖工作服）。野外采集標(biāo)本時醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)整理，應(yīng)穿著顏色明亮的防護(hù)服，并將衣袖或褲管口扎緊以防蜱叮咬人體。一旦發(fā)現(xiàn)有蜱附著體表，應(yīng)當(dāng)用鑷子等工具夾取，不要用手直接摘除。野外作業(yè)或活動的人員可使用驅(qū)避劑噴涂皮膚。

（三）在診療及標(biāo)本的采集、包裝和實驗室檢測等過程中所產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，應(yīng)當(dāng)按照《醫(yī)療廢物管理條例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》等相關(guān)規(guī)定處理。