1.致流產(chǎn)和抗早孕作用

1.1.注射用天花粉對早孕兔子宮收縮的影響：

實驗用成熟雌兔。以交配日作為妊娠第1日。妊娠第10日時，在戊巴比妥鈉麻醉下，經(jīng)腹部切口將連有細塑料管的乳膠水囊（容積約1ml）置入一側(cè)子宮腔內(nèi)。細塑料管經(jīng)腹部和背部皮下，從頸部引出。腹部創(chuàng)口縫復(fù)。次日起在清醒狀態(tài)下記錄手術(shù)兔的宮內(nèi)壓變化。描記子宮活動時，將細塑料管和乳膠囊以水充盈，塑料管與壓力換能器連接，通過記錄儀描記子宮收縮活動曲線。所有實驗兔在給藥前均先記錄子宮自發(fā)活動，并作催產(chǎn)素試驗，即由兔耳緣靜脈注射合成催產(chǎn)素（上海第十制藥廠產(chǎn)品）0.1單位后，觀察子宮反應(yīng)。給藥后24，48，72小時重復(fù)記錄子宮自發(fā)活動和催產(chǎn)素試驗。實驗共分4組，每組用兔4-5只。對照組：不給任何藥物，僅肌肉注射生理鹽水0.5ml/兔；天花粉組：妊娠第11日時，肌注注射用天花粉（上海生化制藥廠產(chǎn)品，系天花粉蛋白的粗提物的無菌冷凍干燥制 劑，每安瓿含2mg），2mg/kg；甲地孕酮10日天花粉組：于注射天花粉前1小時，肌肉注射甲地孕酮混懸液（由上海第十二制藥廠提供）10mg/kg；消炎痛加天花粉組：除肌肉注射天花粉（2mg/kg）外，同時還于妊娠第11、l2、l3日時，肌肉注射消炎痛（以麻油配制），每日2次，每次劑量5mg/kg。實驗結(jié)果表明，早孕兔的子宮處于完全的靜息狀態(tài)，對催產(chǎn)物質(zhì)的刺激缺乏反應(yīng)，但注射足夠量的天花粉后24或48小時，就見子宮自發(fā)活動逐漸加強，子宮對催產(chǎn)物質(zhì)的反映性也明顯提高醫(yī)學(xué)`教育網(wǎng)搜集整理。

此外，上述實驗還證明，天花粉在一定劑量時，對突也有明顯抗早孕作用。它可使胚泡壞死、液化，終致完全吸收。天花粉對兔子宮肌的激活作用，雖可被補充外源性孕激素或應(yīng)用前列腺素合成抑制所防止，但天花粉的抗早孕作用卻不被對抗。這一結(jié)果提示天花粉終止妊娠的作用，并非繼發(fā)于激素分泌的抑制，或前列腺素的合成和釋放，從而支持天花粉直接作用于胎盤滋養(yǎng)層細胞終止妊娠的結(jié)果。

另有報道，取家兔子宮角1.5cm左右懸掛于通氣鉤上，置瑪氏浴槽中，其中有營養(yǎng)液50ml，通以95%O2和5%CO2的混合氣體，水浴37℃，子宮活動用杠桿描記于記紋鼓上。先描記子宮自發(fā)活動30分鐘，然后再加入15-甲基前列腺素F2a（15-甲-PGF2a），測定子宮張力或收縮頻率和幅度增加的15-甲-PGF2d最低閾值濃度。對照組動物共進行了6只離體子宮實驗，除一個子宮有自發(fā)節(jié)律收縮外其余5只子宮均無自發(fā)收縮，加入15-甲-PGF2a引起張力增加的最低閾濃度為10-1000mg/ml，天花粉組進行離體實驗的6只子宮中有5只子宮有明顯自發(fā)節(jié)律收縮，僅一只子宮無自發(fā)收縮，加入15-甲-PGF2a引起興奮的最低閾濃度為l-10mg/ml。實驗表明，天花粉能使假孕兔子宮于用藥后24小時自發(fā)收縮活動增加。

1.2.注射用天花粉對假孕兔子宮孕酮受體（P-R）和雌醇受體（E-R）的影響：取健康成熟雌兔，體重2.5kg以上，靜脈注射人絨毛膜促性腺激素（HCG）500單位以產(chǎn)生假孕，注射當(dāng)天作為假孕1日，然后將動物分成2組，每組7-8只。于假孕第6日、7日給天花粉組每天肌肉注射天花粉注射劑（上海生化制藥廠生產(chǎn)，臨用前用生理鹽水溶解到5mg/2ml）2mg/kgl次。對照組每天注射生理鹽水0.8ml/kgl次。于第8日由耳緣靜脈取血2ml于含肝素（約0.5mg）的離心管中，離心得血漿供測孕酮用。然后將兔放血處死，立即剖腹取下子宮，剪取一段子宮放入營養(yǎng)液中，供進行離體子宮實驗，其余部分用冰生理鹽水洗3次，剪碎后與緩沖液按1：3（W/V）比例混合，置于勻漿管中，在低溫條件下制成勻漿，供受體測定用。P-R、E-R的測定和KA值的求得采用放射受體測定法，參考Rayard等和Andersan等的方法結(jié)合本實驗條件略加修改。按Loury法測定子宮胞質(zhì)液的蛋白含量，二苯胺法測定子宮細胞核的DNA含量，胞質(zhì)液受體fmol/mg蛋白表示，核受體是以fmol/mgDNA表示。作Scatchardplot求得孕酮和P-R及雌二醇和E-R的KA值。血漿孕酮濃度測定按horneycroft報告的方法，以11a羥孕酮琥珀酸酐牛血清蛋白為抗原，對家兔進行免疫，抗血清效價1：2000以上。

實驗結(jié)果表明，假孕第八天子宮胞質(zhì)液和細胞核的P-R含量經(jīng)t測驗，兩組間有顯著差異，說明注射天花粉后，能使假孕兔子宮的P-R含量降低。作Scatchardplot求得孕酮和胞質(zhì)液P-R的KA值：對照組KA=1.08x10(9)M-1，天花粉組KA=0.28x10(9)M,說明天花粉使孕酮和P-R的親和力明顯下降。假孕第八天子宮胞質(zhì)液和細胞核的E- R含量，經(jīng)t測驗，二組間無明顯差異，雌二醇和E-R的KA值：對照值KA=1.01x10(9)M-1，天花粉組KA=1.1×10(9)M-1，兩組間也無顯著差異，表明天花粉組對假孕兔子宮E-R無明顯影響。假孕兔第8日血漿孕酮濃度對照組與天花粉組之間無明顯差異。

一般認(rèn)為子宮活動受激素調(diào)節(jié)，Csapo等報道妊娠子宮所以處于靜息狀態(tài)，是與體內(nèi)血漿孕酮濃度較高有關(guān)，妊娠兔子宮活動可被孕酮所阻抑，并使之對催產(chǎn)素和前列腺素均不敏感。束懷德等。曾報導(dǎo)天花粉能使妊娠兔子宮自發(fā)收縮活動增加，認(rèn)為這種作用可能與天花粉損傷胚胎，使體內(nèi)孕酮水平下降及促使蛻膜釋放前列腺素有關(guān)。實驗采用假孕兔測得第8日的血漿孕酮濃度，與Balduin等，報道的同期孕兔血漿孕酮濃度相近，注射天花粉后孕酮濃度并不下降，與對照血相似，但能使子宮自發(fā)收縮明顯增加，說明天花粉對胚胎和蛻膜的損傷以及繼發(fā)的孕酮下降，可能不是天花粉引起子宮自發(fā)收縮增加的主要機理。Hai等報道妊娠大鼠在臨床前子宮細胞核中P-R含量下降，認(rèn)為臨床子宮活動增加是由于子宮內(nèi)P-R含量減少所致。實驗曾觀察到15-甲-PGF2a對假孕兔有溶黃體作用，血漿孕酮濃度于注射15-甲-PGF2a后24小時下降到極低水平，此時子宮P-R受體含量增加，子宮并無明顯自發(fā)收縮仍處于靜息狀態(tài)。天花粉不改變假孕兔血漿孕酮濃度，但使子宮P-R含量降低并使孕酮與P-R的親和力下降，而同時子宮自發(fā)收縮活動明顯增加。因此設(shè)想，天花粉使子宮P-R含量減少和使孕酮與P-R的親和力降低，可能是天花粉使子宮自發(fā)收縮活動增加的重要機理，子宮P-R可能與子宮活動調(diào)節(jié)有關(guān)。

1.3.天花粉對小鼠抗早孕的作用：

取成熟雌、雄小鼠以2：1合籠，每日上午檢查陰道，以 發(fā)現(xiàn)陰栓日為妊娠1日。于妊娠4、5日,每日皮下注射l次天花粉每10g體重注射0.1ml，于妊娠第8天解剖，記錄妊娠動物數(shù)。天花粉劑量為10、5、2.5、1.25、0.625mg/kg時，妊娠抑制率分別為100%、81.17%、47.16%、47.16%和12.69%，用簡化機率單位法算得天花粉抗早孕作用半數(shù)有效量為1.78±0.28mg/kg。

文獻報道，單獨給予天花粉0.4mg肌肉注射，對早孕小鼠的抑制效果并不理想。上述實驗也觀察到天花粉能終止小鼠早期妊娠，作用隨劑量增加而提高，但在采用使妊娠抑制率達到80%以上的劑量時，可使小鼠體重明顯減輕，對機體產(chǎn)生一定毒性。這說明在臨床上可能因受到藥物毒性的限制，不能通過增加天花粉的劑量來達到提高療效和縮短流產(chǎn)時間的目的。

1.4.外源性甲地孕酮和絨毛膜促性腺激素對天花粉抗早孕作用的影響方法同上。于妊娠4、5日，每日皮下注射天花粉10mg/kg，同時皮下注射甲地孕酮水混懸液50mg/kg，或腹腔注射絨毛膜促性腺激素（HCG）10I.U，妊娠8日解剖，記錄妊娠動物數(shù)。結(jié)果見表3。合并注射的兩組妊娠抑制率均下降。且胚胎均較對照組為小，其中有的與子宮內(nèi)膜分離，游離于子宮腔內(nèi)。

1.5.大花粉與15-甲-PGF2a合并用藥對小鼠的抗早孕作用：

方法同上。于妊娠4、5日，每日皮下注射天花粉0.625mg/kg，同時皮下注射l5-甲-PGF2a0.0125mg/kg，每日上、下午各1次。已知該劑量15-甲-PGF2a對早孕小鼠妊娠抑制率為20%。至妊娠8日解剖，記錄妊娠動物數(shù)。結(jié)果如表3所示。天花粉與15-甲-PGF2a合并用藥組，所有12只小鼠均不妊娠。二藥合用所得的小鼠妊娠抑制率為100%（即ED100）。這表明15-甲-PGF0.0125mg/kg與天花粉0.625mg/kg合用時，抗早孕作用不是相加，而是增加。

1.6.結(jié)晶天花粉蛋白脂質(zhì)體對小鼠的抗早孕作用：

選取6-8周體重20-22g健廉雌鼠，按雌雄2：1合籠，發(fā)現(xiàn)陰栓者為妊娠第一天。將見栓的雌鼠隨機分組，每組10-15只。于妊娠第六天按下列實驗設(shè)計組給藥：第1組結(jié)晶天花粉蛋白脂質(zhì)體（Trichosanthin一Liposome，TL），劑量為每只小鼠注射TL2ug，4ug與8ug，第2組每只注射天花粉40ug；第3組每只注射空白脂質(zhì)體0.5ml；第4組每只注射鹽水0.5ml，作為正常對照。注藥后d5解剖小鼠，觀察其子宮胚胎發(fā)育情況。結(jié)果表明，TL抗早孕劑量為2ug/只，而單純天花粉劑量為40ug/只，其抗早孕率各為66.7%與70%。說明小劑量TL即有明顯的抗早孕活性。TL體外釋放試驗證實，6小時其釋放率為4.6%，72小時達68.2%。提示脂質(zhì)體在節(jié)胃藥物以及避孕研究的應(yīng)用是大有可為的。

1.7.天花粉脂質(zhì)體對早孕鼠血清孕酮水平的影響：

取妊娠6日的小鼠腹腔分別注射不同劑量TL溶液，注藥后5日，眼眶放血，收集血清。以放射免疫測定分析孕酮水平。妊娠鼠TL抗早孕的血清孕酮變化。實驗結(jié)果提示，用藥組與對照組比血清孕酮含量差異顯著（P<0.01）。TL和天花粉所得數(shù)值比較接近，但空白脂質(zhì)體在早孕過程中孕酮含量無明顯變化。關(guān)于天花粉的引產(chǎn)原理，根據(jù)目前的研究情況可以歸納為：天花粉蛋白能直接作用于胎盤滋養(yǎng)層細胞、并有一定的細胞專一性；能選擇性地使胎盤絨毛合體滋養(yǎng)層細胞變性壞死，解體的細胞碎片留在血竇中，引起凝血造成循環(huán)障礙和進一步的大量組織壞死。胎盤絨毛的損傷反映在功能方面，即絨毛膜促性腺激素（HCG）和甾體激素迅速下降到流產(chǎn)的臨界水平以下。由于胎盤形態(tài)和功能嚴(yán)重?fù)p傷的結(jié)果，破壞了母體與胎兒之間的內(nèi)分泌關(guān)系和代謝物的交換，并可能通過尚未弄清楚的機制引起前列腺素合成的增加，發(fā)動宮縮而導(dǎo)致流產(chǎn)。此外，天花粉能使小鼠離體子宮、兔在體子宮收縮增強，并能提高子宮對垂體后葉素的敏感性，其對子宮平滑肌的直接興奮作用，可能也是導(dǎo)致流產(chǎn)的因素之一。

2.抗癌作用

2.1.對小白鼠早期移植肝癌腹水型治療作用：

選擇18-22g健康小白鼠皮下注射瘤細胞懸液（原倍或1：1）0.2ml/只，24小時后稱重隨機分組。治療組皮下注射天花粉0.2ml/只（5mg/kg），間隔4-6日再按原劑量皮下注射天花粉1次。對照組小白鼠皮下注射生理鹽水0.2ml2次，間隔時間同治療組。

同時對治療組與對照組分別抽取1ml/只腹水進行細胞病理學(xué)檢查，觀察細胞總數(shù)和細胞分類。結(jié)果表明天花粉治療腹水型肝癌，可使腹水量減少，生存期延長：實驗按天花粉皮下注射2針的方案重復(fù)2批。生存期延長率達61-76%，體重增加比對照組少，說明治療組腹水量少，生存期平均29-30日，最長者達60日還未見腹水生長而處死。生存期比對照組明顯延長，差別顯著P<0，05（見表5）。治療組小白鼠大多數(shù)未見腹水產(chǎn)生，最后都死于毒性反應(yīng)，偶見個別小白鼠有少量腹水，病理檢查表明腹水中總細胞數(shù)少，絕大多數(shù)為淋巴細胞，并出現(xiàn)淋巴細胞包圍癌細胞的所謂衛(wèi)星現(xiàn)象，還有中性白細胞和巨噬細胞。對照組最后由于肝癌大量腹水衰竭死亡，腹水中細胞總數(shù)多，絕大部分是癌細胞。第3批治療實驗，改為癌細胞接種后24小時皮下注射天花粉0.2ml/只1次，不再治療，實驗說明治療組生存延長率地可達85.6%，但治療組小白鼠也長腹水，最后都死于肝癌。

2.2.對小白鼠晚期移植肝癌腹水型治療作用：

選擇18-22g小鼠皮下注射瘤細胞懸液（1：1），24小時稱重隨機分組，間隔6日腹水已長成，稱重后治療組皮下注射天花粉0.2ml/只，間隔4日稱重后皮下注射天花粉0.4或0.2ml/只，對照組皮下注射生理鹽水0.2m1/只，間隔時間同治療組。結(jié)果天花粉注射1次后腹水量明顯減少，腹水抑制率達73%（P<0.05）

2.3.對小白鼠肝癌實體瘤型的治療作用：

實驗方法同上，結(jié)果顯示天花粉對小白鼠肝癌實體瘤抑制率可達36-38.9%，治療組瘤體明顯小于對照組（P<0.05）。

2.4.結(jié)晶天花粉蛋白對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞的抑制作用：

Jar細胞培養(yǎng)于含10胎牛血清的RPMI1640人工培養(yǎng)液，加有青鏈霉素各100ug/ml。Hela和Fib細胞用DMEM培液，其中胎牛血清和青、鏈霉素含量同前。以上3種細胞均呈單層貼壁生長。按文獻37方法進行實驗。

實驗結(jié)果表明，結(jié)晶天花粉蛋白對Jar人絨癌細胞的增殖有明顯的抑制作用，培育48小時后的皮內(nèi)注射50為3.3ug/ml，而Hela人宮頸癌細胞和正常纖維細胞的皮內(nèi)注射50分別為13.0和16.0ug/ml。此外，結(jié)晶天花粉蛋白對Jar細胞的hCG分泌顯示更強的抑制作用，培養(yǎng)48小時后，抑制50%，hCG分泌的結(jié)晶天花粉濃度為1.3ug/ml。

2．5.另有報道，天花粉溫浸冷凍干燥劑和水浸劑，對子宮癌U-14的抑制率分別為40.4%和30.9%，而煎劑對子宮U-14無作用。近年報道天花粉能抑制艾氏腹水癌

細胞生長，延長荷瘤小鼠的存活期。

3.對免疫功能的影響

3.1.天花粉對荷瘤小鼠紅細胞免疫功能的影響：

健康昆明種雄性小鼠，2-3月齡，體重21.3±4.6g，天花粉組和腫瘤小組小鼠腹腔接種細胞癌細胞懸液，正常組皮下注射等體積生理鹽水。天花粉組于接種24小時后皮下注射天花粉0.2ml（0.2mg）。其他組給予等體積生理鹽水。各組動物于接種腫瘤后ll日分別摘眼球取血，RCIA紅細胞完全結(jié)上一個以上酵母細胞為一花結(jié)，CIC以1：8稀釋度出現(xiàn)（++）為陽性。由表7可知，天花粉組與正常組小鼠的紅細胞C3b受體花結(jié)（RBC-RR）在同一水平，腫瘤組明顯降低，其差異非常顯著（P<0.01），表明荷瘤小鼠紅細胞C3b受體活性明顯受損，經(jīng)天花粉治療后，可使其恢復(fù)至正常水平；天花粉組小鼠紅細胞免疫復(fù)合物花結(jié)（RBC-ICR）增高，與其他兩組均有顯著差異（P<0.01），提示天花粉可增強荷瘤小鼠紅細胞粘附免疫復(fù)合物的能力。這一結(jié)果與CIC測定相一致。并與文獻報道互為印證。

3.2.天花對小鼠唾液腺內(nèi)凝集素受體和免疫球蛋白的影響：

動物為20只成年雄性健康ICR純系小鼠，體重18-22g，分為2組，每組10只，第1組為天花粉組，每日1gl次，每次0.5ml（濃度65mg/ml），共7日，藥液的制備用常規(guī)水提法進行，第2組為對照組，每日皮下注射l次，每次0.5ml生理鹽水。8日，殺死小鼠，取其唾液腺，分別作HE和其它染色。結(jié)果表明，小鼠頜下腺內(nèi)PNA，PBA受體顯著增加，IgG明顯增多、酸性粘多糖也高于對照組，提示天花粉與促進唾液腺內(nèi)半乳糖和乙胺半乳糖的合成以及增加機體免疫功能有關(guān)。

4.抗菌及抗病毒作用

天花粉煎劑在體外對溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、白喉桿菌有一定的抑制作用，對傷寒桿菌、綠膿桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌及金黃色葡萄球菌的作用均較弱。采用病變抑制法和125I放射免疫法在3種細胞培養(yǎng)系統(tǒng)上測定了天花粉蛋白對7種病毒的抑制作用。結(jié)果表明，天花粉蛋白濃度在10ug/ml以下時，對細胞無明顯的毒性作用，在0.001-10ug/ml時對乙型腦炎、柯薩奇B2、麻疹、腺病毒3型單純皰疹病毒I型、水泡性口炎病毒及乙型肝炎病毒等均有明顯的抑制作用，并且這種抑制作用隨天粉蛋白的濃度增大而提高。濃度在0.01ug/ml時可以抑制由100TC皮內(nèi)注射50病毒引起細胞病變的50%、提示，天花粉可能是繼干擾素之后另一種具有廣譜抗毒作用的蛋白質(zhì)。

5.抗艾滋病病毒

體外實驗表明，天花粉蛋白可抑制艾滋病病毒（HIV）在感染的免疫細胞內(nèi)的復(fù)制，減少免疫細胞中受病毒感染的活細胞數(shù)，其有效抑制濃度為0.05-10ug/ml。一種能抑制HIV感染和復(fù)制的蛋質(zhì)稱為抗-HIVTA29。臨床資料亦表明有一定的治療效果。