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    抗核抗體-臨床醫(yī)學(xué)檢驗輔導(dǎo)

    2012-10-15 15:01 來源:
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    為了方便廣大考生更好的復(fù)習(xí)臨床醫(yī)學(xué)檢驗考試,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理了臨床醫(yī)學(xué)檢驗關(guān)于抗核抗體的內(nèi)容,以供各位考生學(xué)習(xí)參考,希望對考生掌握基礎(chǔ)知識有所幫助。

    抗核抗體(ANA)泛指抗各種核成分的抗體,是一種廣泛存在的自身抗體。ANA的性質(zhì)主要是IgG,也有IgM和IgA,甚至IgD和IgE。ANA可以與不同來源的細胞核起反應(yīng),無器官特異性和種屬特異性。ANA主要存在于血清中,也可存在于其他體液如滑膜液、胸水和尿液中。

    ANA在SIE患者的滴度較高,但也出現(xiàn)在其他許多自身免疫病中,在許多研究報告中,都將檢出ANA作為自身免疫甚至自身免疫病存在的依據(jù)。這種現(xiàn)象的機制尚未明了,有待于進一步研究。

    (一)ANA的類型及意義

    由于細胞核成分的復(fù)雜性,不同成分的抗原性也不同;因此就會有多種不同的ANA。

    1.抗核蛋白抗體核蛋白抗原(DNP)由DNA和組蛋白組成。由于DNP抗原存在不溶性和可溶性兩個部分,可分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。不溶性DNP抗體通常不完全被DNA和組蛋白所吸收,它是形成狼瘡細胞的因子;可溶性抗原存在于各種關(guān)節(jié)炎病人的滑膜液中,其相應(yīng)抗體也出現(xiàn)于RA病人的滑膜液中。

    2.抗DNA抗體可以分為兩大類:①抗天然DNA(nDNA)抗體,或稱抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體;②抗變性DNA抗體,或稱抗單鏈DNA(ssDNA)抗體。抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性,70%~90%的活動期SLE病人該抗體陽性,效價較高,并與病情有關(guān)??箂sDNA抗體可見于多種疾病中,特異性較差。

    3.抗ENA抗體可提取性核抗原(ENA)多從動物的胸腺中提取。先將胸腺勻漿并破碎細胞,分離出細胞核;再經(jīng)鹽水或磷酸鹽緩沖液處理后,很容易從胞核中提取出來。ENA不含DNA,對核糖核酸酶敏感。近年來的研究表明,ENA可分為十幾種,現(xiàn)僅介紹幾種主要的ENA及其相應(yīng)抗體。

    (1)抗PNP抗體:PNA即核糖核蛋白,對核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感,加熱561h變性??筆NP抗體多見于混合性結(jié)締組織病。高效價的抗PNP抗體對混合性結(jié)締組織病有診斷意義,而低效價的抗PNP抗體可在SIE患者中發(fā)現(xiàn)。

    (2)抗Sm抗體:該抗體在一名Smith姓的患者血中首次發(fā)現(xiàn),便以其名字的前兩個字母命名。Sm抗原系非核酸性糖蛋白,對DNase及RNase均不敏感,但經(jīng)碘酸鹽及胰蛋白酶處理后可被水解。抗Sm抗體是SLE的特異性標(biāo)志之一,但陽性率偏低,約為30%~4%;可能是SIE的一種回憶性抗體,故在非活動期亦可檢出。若將抗dsDNA和抗Sm抗體同時檢測,可提高SLE的診斷率。

    (3)抗SS-A抗體:SS-A為干燥綜合征(SS)的A抗原,可從動物胸腺的胞漿中提取??筍S-A抗體主要見于SS,但也可見于其他自身免疫病如SLE中。

    (4)抗SS-B抗體:SS-B為SS的B抗原,亦可從動物胸腺或小鼠肝細胞漿中提取,可被胰蛋白酶、輕度加熱或改變?nèi)芤簆H而破壞。13%的SLE及30%的SS患者有抗SS-B抗體。

    (5)抗組蛋白抗體(AHA):組蛋白是一種堿性蛋白質(zhì),含有大量的賴氨酸及精氨酸。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)組蛋白抗原可分為5個亞單位:H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4.抗組蛋白抗體及其抗亞單位抗體見于SLE及藥物誘發(fā)的LE.SLE病人血清中的抗組蛋白亞單位抗體檢出率順序為:抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A及抗H-4,以抗H-2B和抗H-1為主,并與SLE的活動性有關(guān)。

    (二)ANA的檢測方法

    由于ANA的復(fù)雜性及多樣性,故測定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術(shù)等。

    1.免疫熒光法檢測血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質(zhì),結(jié)果比較穩(wěn)定可靠,在熒光顯微鏡下見到的細胞核有熒光著色為陽性反應(yīng)。如將患者血清先進行不同比例的稀釋,可以做大致的定量試驗,在1:80稀釋仍然雖陽性時,對SLE的診斷有較大的參考價值。在油鏡下觀察結(jié)果,可以將ANA陽性的熒光現(xiàn)象分成4種主要的熒光核型,核型的確定對臨床診斷有進一步的參考價值。①周邊型表示抗DNA抗體存在;②均質(zhì)型表示有抗DNP抗體;③斑點(顆粒)型多為抗ENA抗體;④核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現(xiàn)周邊型、勻質(zhì)型或混合型,斑點型多見于混合結(jié)締組織病,而硬皮病多為核仁型;周邊型對SLE有較高的特異性。

    近年有人用錐蟲或血鞭毛蟲(例如綠蠅短膜蟲試驗)醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理作基質(zhì)測定抗dsDNA抗體,因為這些血寄生蟲的動基體內(nèi)含大量的純dsNDA,無其他抗原干擾;在陽性結(jié)果時,可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優(yōu)點。另外,短膜蟲對人畜無害,可以人工養(yǎng)殖,來源方便,值得推廣。

    2.放射免疫法常用檢測抗DNA抗體,有Farr法及過濾法。①Farr法的原理為用同位素標(biāo)記DNA,被標(biāo)記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結(jié)合,經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀,然后比較沉淀物和上清液中的放射活性,從而得出DNA結(jié)合活性,一般結(jié)合率大于20%為陽性。②過濾法是在分離結(jié)合物時用纖維素酯薄膜濾器(孔徑為0.45μm)進行過濾,游離的DNA被濾去而與抗體結(jié)合的復(fù)合物被阻留在濾膜上。

    3.ELISA臨床上主要是應(yīng)用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體,其重復(fù)性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。目前已有試劑盒供應(yīng)。

    4.免疫印跡(immunoblotting)先將混合抗原作凝膠電泳,分離開不同的區(qū)帶,然后將這些帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上,最后用酸標(biāo)抗體或放射性同位素標(biāo)記抗體進行檢測和分析。由于該試驗不需純化的單個抗原,可在同一固相上作多項分析檢測,靈敏度高,特異性強。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測,如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。

    另外,還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結(jié)合試驗等。這些試驗要求的實驗條件比較低,但敏感性也比較低。

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