1.隱丹參酮的吸收、分布、排泄和代謝：

以薄層分離和雙波長(zhǎng)薄層色譜掃描儀分離及測(cè)定生物樣品中隱丹參酮的含量。將29只小鼠（雄性，體重22-25g，以下同），分成6組，每組3-6只動(dòng)物，禁食8小時(shí)后，每鼠以隱丹參酮2mg灌胃，給藥后不同時(shí)間處死，取全胃腸道及其內(nèi)容物研成勻漿，提取測(cè)定藥物含量。在半對(duì)數(shù)紙上以藥物回收率作縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)作圖，求得隱丹參酮在胃腸道的半量消失時(shí)間為31/3小時(shí)。另外，將藥物放入小鼠離體胃腸道內(nèi)在生理鹽水中溫孵（37℃）12小時(shí)，測(cè)定藥物回收率為98%，因此上述藥物自整體胃腸道消失的情況，基本上反映口服后藥物的吸收，另取8只小鼠禁食8小時(shí)后，灌胃隱丹參酮400mg/kg，2小時(shí)后處死，取各組織（2只動(dòng)物為一個(gè)樣品）研成勻漿提取測(cè)定藥物含量，結(jié)果表明，口服后肝及肺含量較高，肺、心其次，脾、血漿及腎依次遞減。另將6只小鼠。靜脈注射隱丹參酮（以少量吐溫80及二甲基亞砜助溶）40mg/kg，5分鐘后處死，測(cè)得藥物在組織的含量，以腦、肺、心較高、肝、血漿、腎及脾依次遞減。8只大鼠（雄性，體重120-150g，以下同），禁食2小時(shí)后，每鼠灌胃隱丹參酮350mg/kg，給藥后分段收集尿液，測(cè)定藥物含量。給藥后，原形藥物自大鼠尿中排出很少，服藥24小時(shí)僅排出給藥量的0.21%，48小時(shí)共排出0.34%，另取5只大鼠禁食12小時(shí)后灌胃隱丹參酮150mg/kg，在乙醚麻醉下插膽管，并分段收集膽汁，測(cè)定藥物含量。給藥后6、12及20小時(shí)內(nèi)，原形藥自膽汁排出為給藥量的0.17%、0.48%及0.80%。說(shuō)明藥物自腸道吸收后大部分在體內(nèi)。大鼠口服隱丹參酮后，尿、膽汁及腸道內(nèi)容物經(jīng)提取及薄層層離后，可得7個(gè)斑點(diǎn)，純化后得7個(gè)紅色或橙黃色結(jié)晶。測(cè)定其理化性質(zhì)，其中代謝物6號(hào)為未改變的隱丹參酮，7號(hào)為丹參酮ⅡA,1號(hào)極性最大，根據(jù)高分辨質(zhì)譜測(cè)定，代謝物2、3、5及6號(hào)體外抑菌試驗(yàn)均為陽(yáng)性，但仍以原形藥（6號(hào)）活性最強(qiáng)，因此在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮藥理作用可能仍以原形藥為主。將隱丹參酮放入離體大鼠小腸內(nèi)溫孵（37℃）5小時(shí)后，腸內(nèi)容物經(jīng)提取及薄層層離后，除有原形藥外，尚有少量丹參酮ⅡA。大鼠口服隱丹參酮后3小時(shí)內(nèi)膽汁中首先出現(xiàn)的代謝產(chǎn)物除原形藥外。也是丹參酮ⅡA，說(shuō)明腸道內(nèi)或肝臟的脫氫酶可能使隱丹參酮轉(zhuǎn)化成丹參酮ⅡA。1、2、3、4及5號(hào)比隱丹參酮極性大的代謝物在大鼠口服藥物6小時(shí)以后才陸續(xù)在膽汁中出現(xiàn)，說(shuō)明藥物經(jīng)過(guò)反復(fù)的肝腸循環(huán)，在肝臟由肝微粒體藥酶催化，逐漸轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的代謝產(chǎn)物。例如羥基丹參酮ⅡA可能由羥基化酶所催化，丹參酮ⅡA與谷氨酸的縮合物則可能由?；o酶A和谷氨酸2-N酰基轉(zhuǎn)移酶參與轉(zhuǎn)化。因此設(shè)想，隱丹參酮在動(dòng)物體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化可能有下列途徑。

2.丹參酮的膽汁排泄與肝內(nèi)轉(zhuǎn)化：

2.1.試驗(yàn)動(dòng)物為大鼠，雄性、體重350-400g，10%烏拉坦1g/kg腹腔麻醉，以小兒頭皮針插入總膽管，固定后先收集1小時(shí)的膽汁作為空白對(duì)照。藥物先溶入少量二甲基甲酰胺。然后以1%羧甲基纖維素鈉水溶液稀釋至10mg/ml。由十二指腸給藥，而后按時(shí)定量收集膽汁，膽汁貯于冰箱過(guò)夜，以氯仿提取兩次，合并氯仿液，水浴蒸于，貯于干燥器，測(cè)試前以50ml氯仿定量稀釋，進(jìn)行高效液相分離并定量；丹參酮在肝勻漿內(nèi)的轉(zhuǎn)化，用體重160g雄性大鼠乙醚麻醉后，取肝臟，稱重后以0.15M氯化鉀、0.24M煙酰胺制備均漿，雙層紗布過(guò)濾，濾液再以上述溶液稀釋至每10ml相當(dāng)于肝組織6g。于100ml錐形瓶中加入PH7·4的磷酸緩沖液4ml，肝勻漿液2ml，丹參酮樣 品1mg溶于95%乙醇0.2ml中，對(duì)照組加0.2ml不含丹參酮的95%乙醇液。37℃保溫2小時(shí)，終止反應(yīng)后用氯仿12ml分二次萃取。合并萃取液。水浴蒸干。測(cè)試前以氯仿100ml溶解樣品，應(yīng)用薄層分離并定量、（硅膠一CMC薄層，展開劑為苯-丙酮（95：5）：肝內(nèi)抑菌活性成分檢出，試驗(yàn)采用小鼠，給丹參酮Ⅱ-A后，經(jīng)不同間隔時(shí)間，取肝組織，無(wú)水硫酸鈉制成脫水肝粉，進(jìn)行硅膠干柱層析，分離出相應(yīng)色帶，參比物丹參酮ⅡA，切下該段色帶后以丙酮洗脫，回收丙酮后作抑菌試驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠十二指腸給藥后一般在1小時(shí)左右即可測(cè)得膽汁中有微量的丹參酮排出，其排出高峰在給藥后3小時(shí)左右。給總丹參酮制劑組，劑量24mg其中含丹參酮ⅡA3.09mg，隱丹參酮0.6mg。該組動(dòng)物排出的膽汁中含丹參酮ⅡA量較丹參酮ⅡA組高5-10倍以上。提示制劑組中的隱丹參酮有部分在肝內(nèi)可轉(zhuǎn)化為丹參酮ⅡA，此外總酮制劑組的腸吸收較單體丹參酮ⅡA的吸收為多，也可能是其中因素之一。十二指腸給予隱丹參酮后膽汁中不僅有隱丹參酮，尚出現(xiàn)丹參酮ⅡA的色譜峰。給丹參酮Ⅰ后膽汁中所排出的丹參酮Ⅰ較丹參酮ⅡA較丹參酮ⅡA及隱丹參酮略有增多，說(shuō)明不同結(jié)構(gòu)的丹參酮其在肝內(nèi)的排出速度是不相等的。大鼠十二指腸給隱丹參酮后，膽汁中出現(xiàn)丹參酮ⅡA，提示隱丹參酮在肝內(nèi)可經(jīng)脫氫反應(yīng)轉(zhuǎn)化為丹參酮ⅡA。為此，采用大鼠正常肝的習(xí)漿液與隱丹參酮在37℃保溫2小時(shí)，終止反應(yīng)后以氯仿提取勻漿液，蒸于氯仿后，用50ml氯仿溶解樣品，然后在硅膠-CMC薄層上精確滴加10ml樣品，展層后圖譜上可見(jiàn)勻漿液中除隱丹參酮外，還形成另一產(chǎn)物，其Rf值為0.42，與濃硫酸反應(yīng)顯綠色。其紫外吸收與已知品丹參酮ⅡA完全一致。從而證明隱丹參酮在肝勻漿內(nèi)經(jīng)脫氫反應(yīng)轉(zhuǎn)化為丹參酮ⅡA。此外亦發(fā)現(xiàn)在以二氫丹參酮Ⅰ與肝勻漿保溫后，在勻漿液中形成另一產(chǎn)物與濃硫酸反應(yīng)呈蘭紫色，其Rf值與丹參酮Ⅰ相同，但生成率較低。

為了解服用丹參酮后肝內(nèi)有無(wú)抑菌活性成分，除直接由膽汁中測(cè)定其含量外，還參照前文觀察了肝膽及尿液中的抑菌活性成分，應(yīng)用分枝桿菌607為指示菌。藥物制劑分別為丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ及隱丹參酮，藥物均配制成油劑，劑量為2mg/只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用體重20-25g的雄性小鼠，每組12只。于給藥后的2、4、16、30小時(shí)分別處死3只，在無(wú)菌條件下用皮膚鉆孔器切下直徑6mm的肝組織，同時(shí)收集血、尿與膽汁，分別置入事先準(zhǔn)備好的含有分枝桿菌607的瓊脂平板上，在37℃溫箱經(jīng)36-48小時(shí)，以抑菌圈達(dá)10mm以上為正反應(yīng)，結(jié)果表明：給藥后的第2小時(shí)各組動(dòng)物的肝、膽、血、尿中很少出現(xiàn)抑菌物質(zhì)出現(xiàn)，其抑菌圈分別為隱丹參酮組26mm（2/3）。丹參酮ⅡA10-20mm（3/3）、丹參酮Ⅰ11mm（1/3）。且該抑菌物質(zhì)在肝內(nèi)停留時(shí)間較長(zhǎng)于小時(shí)30肝內(nèi)仍可檢出。（分母為試驗(yàn)樣品數(shù)，分子代表具有抑菌活性數(shù)）。

2.2.丹參酮ⅡA磺酸鈉：

實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)記丹參酮ⅡA磺酸鈉比活性為8.4uci/mg。小鼠體重20-22g，一次靜脈注射3uci/只。分別于給藥后1.6和24小時(shí)殺死小鼠，取出心、肝、膽囊、肺、腎、胃、腸和胃腸內(nèi)容物。稱取一定量組織（一般在20mg）左右，尿和血液吸取量不超過(guò)0.1ml過(guò)氧化氫，置于70-80℃水浴中消化30分鐘左右，然后用FJ-353雙道液體閃爍儀測(cè)定放射活性。所用閃爍液含有0.03%PPO和0.4%POPOP的二乙醇甲醚和二甲苯閃爍液。以14C正十六烷作內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)淬滅校正。各組織中的放射活性以每分鐘脈沖數(shù)（cpm）100mg濕重計(jì)算。結(jié)果表明，小鼠1次靜脈注射后l小時(shí)，組織中以肝、肺和腸為高；腎、脾、心、胃次之；腦最低。在6和24小時(shí)均趨于減少。腸內(nèi)容物的放射活性在3個(gè)不同時(shí)間均占首位，分別為注入量的8.1，52.O和32.7%。膽囊及內(nèi)容物的放射活性按每只膽囊重量計(jì)算在6和24小時(shí)，分別為注入量的12.7和1.2%。小鼠1次靜脈注射35S-丹參酮ⅡA后連續(xù)收集24，48和72小時(shí)的尿和糞，按上述方法消化，測(cè)定放射活性。停止飼食的3日內(nèi)每天灌胃50%葡萄糖溶液1ml。

在給藥后24小時(shí)內(nèi)尿中排泄率為10.2%，24-48小時(shí)和48-72小時(shí)內(nèi)分別為4.5%和1.8%，72小時(shí)內(nèi)總排泄率為16.5%。第1日內(nèi)糞中排泄率為32%。第2日和第3日內(nèi)分別為24.1%和19.6%。3日內(nèi)總排泄率為75.7%。3日內(nèi)尿和糞的總排泄率為92.2%。從上述結(jié)果可以認(rèn)為35S-丹參酮ⅡA的排泄途徑主要是由膽道排至腸內(nèi)，由糞中排出。小鼠靜脈注射35S-丹參酮Ⅱ3uci/只后2，5，10，20，30，60，90，120和240分鐘從眼后靜脈叢取血O.01ml，測(cè)定全血的放射活性，結(jié)果給藥后2分鐘血中平均放射活性為75843cpm/0.1ml血，90分鐘已降至3758cpm/0.1ml血。至240分鐘仍在低水平。小鼠靜脈注射一定量35S-丹參酮ⅡA磺酸鈉后收集24小時(shí)的尿，濃縮分離后經(jīng)薄層鑒定，表明一個(gè)是原形藥，另一個(gè)為代謝產(chǎn)物。

2.3.丹參素在生物樣品中的藥代動(dòng)力學(xué)：

以醋酸乙酯為溶劑，分別掃描激發(fā)光譜與熒光發(fā)謝光譜，峰波長(zhǎng)各為?EX285nm，?EX314nm。丹參素濃度在1.0-9.0xl0(-6）g/ml范圍內(nèi)，與熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.9996，回歸方程C=1.0168x10-7F-1.815x1O(-7）。丹參素的醋酸乙酯提取穩(wěn)定，于3小時(shí)內(nèi)測(cè)得的熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)恒定。于血漿中，按上列丹參素濃度線性范圍的熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)表明，其直線相關(guān)關(guān)系亦屬良好，r=0.9997；回歸方程C=1.497×10(-7）F-1.470×10(-7）。分別吸取丹參素純品水溶液（0.03mg/ml）0.15-1.35ml，水稀釋至1.50ml，各加入家兔空白血漿1.0ml，稀H2SO40.5ml，用醋酸乙酯提?。?x1.5ml），于?EX285nm加血漿，稀釋至2.5ml，同法操作，作為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)得回收率結(jié)果平均為76.47±2.427%，變異系數(shù)CV：3.174%（n=20）。

取家兔5只，經(jīng)快速耳靜脈注射丹參素（針劑30mg/kg）后，于5、15、30、60、90、120擴(kuò)150分鐘定時(shí)抽血、取血漿，如前操作，測(cè)定血藥濃度，用空白血漿作對(duì)照。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的均值，以丹參素濃度的對(duì)數(shù)與時(shí)間作圖，為一直線。顯示丹參素的藥素的藥代動(dòng)力學(xué)為單室模型，其參數(shù)消除速率常數(shù)和生物半衰期各為：Kel=0.0456±0.0141分鐘：t1/2=16.58±5.768分鐘。