果在測(cè)定活性之前所貯的樣品酶活性有了降低,無(wú)論所用的儀器如何先進(jìn),也不能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。在適當(dāng)?shù)臈l件下酶會(huì)失活,因而必須強(qiáng)調(diào)在收集樣品之后應(yīng)盡可能快速測(cè)試酶活性,最好當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定。關(guān)于酶樣品的貯存與處理應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
1.酶活力測(cè)定最常用的樣品是血清或血漿。制備血漿所用的抗凝劑可抑制某些酶的活性,如EDTA能抑制ALP,草酸鹽抑制LDH,肝素對(duì)CK及某些其他酶有輕微的抑制作用,故一般樣品以血清為佳醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
2.多數(shù)血清酶以較高濃度存在于紅細(xì)胞、白細(xì)胞或血小板中。因此分離血清時(shí)應(yīng)注意避免溶血。
3.光照對(duì)CK活性有抑制作用。因此,主張CK測(cè)定的血清應(yīng)貯存于4℃的暗處,測(cè)定時(shí)應(yīng)該注意避光。
4.由于血清白蛋白對(duì)酶蛋白有穩(wěn)定作用。在它的存在下,某些酶在室溫下可保存1~2天而無(wú)明顯失活。
5.有些酶由于自身的特性。在貯存時(shí)需特別加以注意。例如LDH同工酶在冰箱保存不穩(wěn)定,在室溫反而穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng),所以測(cè)定LDH活力的血清樣品,應(yīng)置于室溫下,2~3天內(nèi)可保持穩(wěn)定,不能存放冰箱過(guò)夜。
6.由于酶很容易發(fā)生表面變性。因此在操作時(shí)應(yīng)避免形成泡沫。
7.巰基對(duì)于大多數(shù)酶來(lái)說(shuō)是十分重要的,可能起如下幾方面的作用:
①參與催化;
②和底物結(jié)合;
③組成變構(gòu)部位;
④維持酶的三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)。
因此,使巰基保持天然狀態(tài)是使許多酶穩(wěn)定化的最重要的條件之一,基于這個(gè)理由,在酶的活性測(cè)定、抽提、制備以及保存過(guò)程中,??商砑樱璖H保護(hù)劑,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇等。