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    胃癌與免疫-抗體導(dǎo)向治療

      本世紀(jì)初Ehrilich曾提出用抗體導(dǎo)向治療腫瘤的設(shè)想,并稱之為魔彈。近一個世紀(jì)來,人們不斷努力,反復(fù)實驗,但這一設(shè)想一直沒有很發(fā)實現(xiàn)。自1976年單克隆抗體技術(shù)問世以來,人們又燃起了應(yīng)用魔彈治療腫瘤的希望,理由是抗腫瘤單克隆抗體更加特異,抗原決定簇明確,可以大量生產(chǎn),可能更適合于導(dǎo)向治療。進(jìn)入八十年代,我國就有許多實驗室進(jìn)行胃癌單克隆抗體的制備工作,是很艱苦的工作,不一定能堅持下來。但是有些實驗室從胃癌單克隆抗體的制備,到最后用于臨床診斷和治療,通過不斷努力,做出了很好的成績。若要實現(xiàn)腫瘤的導(dǎo)向治療,而且卓有成效,必須經(jīng)以下幾個關(guān)鍵步驟。

      單克隆抗體的制備

      目前單克隆抗體的制備多采取細(xì)胞融合的方法。國內(nèi)外產(chǎn)生胃癌單克隆抗體也是采取這個辦法。但要得到特異性好,效價高及親合力強(qiáng)的抗體,還必須采取許多措施。首先在選擇抗原上下功夫。避免單純用細(xì)胞系,因為細(xì)胞系經(jīng)過長期培養(yǎng)總要丟掉某些抗原,而采用新鮮標(biāo)本可以彌補(bǔ)這個問題。他們用手術(shù)切除的新胃癌標(biāo)本結(jié)合細(xì)胞系,原發(fā)病灶的細(xì)胞與轉(zhuǎn)移病灶的細(xì)胞并用,這樣容易得到不同的抗原決定簇的單克隆抗體,因而得到的MG系列有較多的類型。同時他們制備篩選了大量抗體,從幾十個雜交瘤細(xì)胞中精選出來幾株高效價,高親合力的,穩(wěn)定分泌的細(xì)胞株,組成MG系列。

      第二個必要的措施是要選擇一種好的篩選抗體的方法。常用的篩選辦法是酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)及免疫組織化學(xué)的方法。從目前來看,以后者為好,它的優(yōu)點是組織切片中抗原成分很復(fù)雜,抗體與何種細(xì)胞成分反應(yīng),一旦了然,如胃癌單克隆抗體,只應(yīng)同胃癌細(xì)胞反應(yīng),若是其它細(xì)胞成分也反應(yīng),如果不是非特異染色,就是抗原成分交叉,即有共同抗原??梢詫⒎翘禺惾旧徒徊娣磻?yīng)的抗體丟掉,只留下較特異的抗體,所以用免疫組化篩選的效果全面而徹底,得到的信息多。在免疫組織化學(xué)的方法中,以ABC法比較敏感,即使反應(yīng)較弱的抗體也能顯示出來。免疫熒光間接法,用起來也很方便,但敏感性差一些,兩者都能節(jié)省時間。在篩選時還有一個問題城要注意,就是石蠟切片與冰凍切片枯一定情況下都要使用。篩選抗體時用石蠟切片,可以選出效價高,能在石蠟切片上染色的抗體。但是石蠟切片經(jīng)過了酒精及二甲苯脂溶劑的處理,脂性抗原已經(jīng)去掉,所以與脂溶性抗原有關(guān)的抗體不能篩選出來。在確定抗體與那些組織有交叉反應(yīng)時,則必須用冰凍切片,因為冰凍切片上,抗原未丟失,若無交叉反應(yīng),才是真正的沒有交叉,所以用石蠟切片檢測抗體有無與其它組織反應(yīng)是不可靠的。

      單克隆抗體的特異性

      單克隆抗體能在人體應(yīng)用有效,必須有較高的特異性及親合力。

      首先必須與大多數(shù)胃癌標(biāo)本切片中的胃癌細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。如能對其中多數(shù)細(xì)胞和各種類型的胃癌都起陽性反應(yīng)則更好。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集,整理MG系列的鼠鼠抗體對各種不同分化的胃癌陽性率為67%~100%,pCI抗體對胃癌的結(jié)合力是比較強(qiáng)的。

      另一個檢測特異性的辦法是將抗體用核素標(biāo)記后注入帶人胃癌的裸鼠中,觀察有關(guān)抗體是否向人腫瘤中濃集。如將胃癌的單抗MGb2結(jié)合131I后,給荷人胃癌裸鼠注射,則可在體外顯像。在注射后第7天時,瘤正常組織的放射比為16.22,說明抗體可在胃癌中濃集16倍。同時可結(jié)合131IMGb抗體注入后,腫瘤生長慢,瘤組織中呈大片壞死,而空白對照,單純抗體的對照組腫瘤生長快,分裂相多而極少壞死。

      在體外也可將抗體交聯(lián)抗癌藥物,加入胃細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)中,以觀察抗體結(jié)合藥物后比單純藥物或單純抗體有更強(qiáng)的導(dǎo)向殺傷作用。對殺傷的細(xì)胞的檢測,過去都用Cr51釋放,3HTdr摻入等方法,現(xiàn)在多用噻唑蘭(MTT)的方法,此法不用核素,比較完全,準(zhǔn)確度也不差。當(dāng)然抗體在荷人腫瘤的裸鼠中能濃集,所以殺傷腫瘤作用也不明顯。因為單克隆抗體由鼠產(chǎn)生,對鼠的組織不發(fā)生反應(yīng),只對所帶人的腫瘤反應(yīng),所以這種濃集是順理成章的,但當(dāng)人用時,各種人的組織難免在抗原性上與人的胃癌有交叉反應(yīng),所以濃集起來就困難得多。

      當(dāng)然檢測單克隆抗體特異性的指標(biāo)還有許多,如在免疫電鏡下看標(biāo)記抗體是否能特異地與胃癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)結(jié)合或向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移(內(nèi)化);還可以檢測抗體的親合力。

      單克隆抗體人體內(nèi)應(yīng)用

      單克隆抗體的應(yīng)用很多,如用它作免疫組織化學(xué)的試劑,進(jìn)行病理診斷,用它裝備ELISA試劑盒進(jìn)行胃癌血清學(xué)診斷等。這些在MG系列及其它系列的胃癌單克隆抗體都有所報道。但是這里講的是如何把特異性好,在荷人腫瘤的裸鼠中能定位人的胃癌的抗體用于病人的診斷與治療。這種診斷與治療被稱為導(dǎo)向診斷及導(dǎo)向治療。

      單克隆抗體用于人體前,必須進(jìn)行一些檢查:①無熱源;②作急性毒試驗,如給小鼠尾靜脈注射時,不發(fā)生死亡或病變等。并經(jīng)自愿者受試,不出現(xiàn)不良反應(yīng),然后可申報衛(wèi)生部批準(zhǔn)進(jìn)行臨床病人應(yīng)用。達(dá)到國家生物制品鑒定部門的標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)過在指定的醫(yī)院進(jìn)行Ⅱ期,Ⅲ期臨床試驗后,方能批準(zhǔn)在市場上出售。目前MG系列及pC系列均能在病人身上用其核素標(biāo)記的抗體進(jìn)行顯像,作為腫瘤的診斷,也可用來進(jìn)行實驗治療,但尚未取得明確的療效報告。pC系列研制的產(chǎn)品在手術(shù)時可批示胃癌病灶或轉(zhuǎn)移病灶的部位,作為手術(shù)導(dǎo)向。

      人用鼠抗體存在的問題

      目前大部分單克隆抗體是鼠鼠細(xì)胞融合而成的,抗體本質(zhì)上是鼠的免疫球蛋白。人用后,它可作為抗原使人體產(chǎn)生抗鼠的抗體,人抗鼠抗體很快與注入的鼠抗體發(fā)生作用,使鼠抗體很快失效清除。而鼠抗體對人來說是異種蛋白,容易發(fā)生過敏,所以目前要用鼠抗體,必須將其進(jìn)行改造。一種辦法是由胃蛋白酶消化鼠抗體使之成為F(Ab)2,這樣保留其與抗原作用的可變區(qū),去除容易誘發(fā)過敏及抗體產(chǎn)生的FC段,這樣一來,產(chǎn)生人抗鼠抗體的機(jī)會就少一些。

      目前大家都注意用基因工程改造鼠抗體的方法。因為用人人雜交瘤產(chǎn)生人的單克隆抗體十分困難。解決的辦法有兩個,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集,整理一是從病人的淋巴細(xì)胞中單克隆抗腫瘤的抗體基因,表達(dá)的抗體就是人的抗體;另一辦法是對鼠抗體進(jìn)行基因工程改造,例如可從鼠抗腫瘤單克隆抗體細(xì)胞系中提出其RNA,反轉(zhuǎn)錄成cNDA,用pCR擴(kuò)增,克隆出其輕鏈及重鏈的可變基因,把這種基因在真核細(xì)胞或載體中表達(dá)出來的一種或可變區(qū)蛋白,即是一種抗腫瘤的小抗體,或者把這種小抗體的基因與人的FC段的基因聯(lián)接,組成一個嵌合基因,可變區(qū)仍是鼠的,恒定區(qū)是人的,將來表達(dá)一種嵌合抗體。也有把輕鏈可變區(qū)基因與重鏈可變區(qū)聯(lián)接一條單鏈的抗體,這三條抗體為單鏈抗體、嵌合抗體、小抗體都可試用于臨床,看有無活性及診斷和治療效果。

      另外的辦法是將抗腫瘤抗體的輕重鏈可變區(qū)基因與另一個效應(yīng)基因聯(lián)接,如把腫瘤壞死因子基因,CD8的基因或白細(xì)胞介素2-的基因與抗體基因聯(lián)接,試圖既發(fā)揮抗體的導(dǎo)向作用,又發(fā)揮使腫瘤發(fā)生壞死的腫瘤壞死因子的作用,這些改變是人們正在研究的,以達(dá)到鼠抗體人化目的的一些辦法。

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