流式細(xì)胞儀原理及操作步驟：

流式細(xì)胞儀是集單克隆抗體、熒光化學(xué)、激光、計(jì)算機(jī)等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進(jìn)儀器，已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測(cè)人白細(xì)胞表面標(biāo)志可對(duì)白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對(duì)淋巴細(xì)胞群和亞群進(jìn)行精確分類，還能分離純化某一群或亞群細(xì)胞。活細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測(cè)的標(biāo)本準(zhǔn)備，染色后也能在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察，在某些實(shí)驗(yàn)條件下，活細(xì)胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。

（一）原理

活細(xì)胞表面保留有較完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，再用熒光標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測(cè)定的熒光強(qiáng)度和陽性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。

（二）操作步驟

制備活性高的細(xì)胞懸液（培養(yǎng)細(xì)胞系、外周血單個(gè)核細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、脾細(xì)胞等均可用于本法）

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用10%FCSRPMI1640調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106-1×107/ml

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取40μl細(xì)胞懸液加入預(yù)先有特異性McAb（5-50μl）的小玻璃管或塑料離心管，再加50μl1∶20（用DPBS稀釋）滅活正常兔血清

↓4℃30min

用洗滌液洗滌2次，每次加洗滌液2ml左右

1000rpm×5min

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棄上清，加入50μl工作濃度的羊抗鼠（或兔抗鼠）熒光標(biāo)記物，充分振搖↓4℃30min

用洗滌液洗滌2次醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理，每次加液2ml左右

1000rpm×5min

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加適量固定液（如為FCM制備標(biāo)本，一般加入1ml固定液，如制片后在熒光顯微鏡下觀察，視細(xì)胞濃度加入100-500μl固定液）

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FCM檢測(cè)或制片后熒光顯微鏡下觀察（標(biāo)本在試管中可保存5-7天）