血清總蛋白測定法:
血清總蛋白測定一般采用雙縮脲比色法,它是目前首先推薦的蛋白質(zhì)定量方法。此法的原理是蛋白質(zhì)分子中的肽鍵在堿性條件下與二價銅離子(Cu2+)作用生成藍(lán)紫色的化合物,這種顏色反應(yīng)強(qiáng)度在一定濃度范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量成正比,經(jīng)與同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液比較,即可求得蛋白質(zhì)含量。此反應(yīng)的優(yōu)點是清、球蛋的反應(yīng)性相近,操作簡單,重復(fù)性好,干擾物質(zhì)少,為首選的常規(guī)方法,其缺點是靈敏度較低。
原理:
血清(漿)中蛋白質(zhì)的肽鍵(一CO—NH一)在堿性溶液中能與2價銅離子作用生成穩(wěn)定的紫紅色絡(luò)合物。此反應(yīng)和2個尿素分子縮合后生成的雙縮脲(H2N—OC—NH—CO-NH2)在堿性溶液中與銅離子作用形成紫紅色的反應(yīng)相似,故稱之為雙縮脲反應(yīng)醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)整理。這種紫紅色絡(luò)合物在540nm處有明顯吸收峰,吸光度在一定范圍內(nèi)與血清蛋白含量呈正比關(guān)系,經(jīng)與同樣處理的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液比較。即可求得蛋白質(zhì)含量。