分離結(jié)合與游離標(biāo)記物的方法有哪些?
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理想的分離方法應(yīng)分離徹底、迅速;分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡,而且效果不受反應(yīng)介質(zhì)因素的影響;操作應(yīng)簡(jiǎn)單、重復(fù)性好以及經(jīng)濟(jì)。方法:
1. 第二抗體沉淀法:反應(yīng)完成后加入二抗形成復(fù)合沉淀。為增強(qiáng)效果可加入一定量的與一抗同種動(dòng)物的血清或IgG,或是將二抗與某些顆粒固相物連接。
2. 聚乙二醇(PEG)沉淀法:能非特異地沉淀抗原抗體復(fù)合物等大分子蛋白質(zhì),而不沉淀小分子抗原。當(dāng)溫度髙于30℃時(shí),沉淀物易復(fù)溶。
3. PR試劑法 先將二抗與PEG按一定比例混合成懸液后進(jìn)行試驗(yàn)。此法保留了二者的優(yōu)點(diǎn),節(jié)省了二者的用量,且分離迅速,簡(jiǎn)便。
4. 活性炭吸附法:活性炭可吸附小分子游離抗原或半抗原,而大分子蛋白(如抗體和免疫復(fù)合物)則留在溶液中。
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