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瑞氏染色法是檢驗(yàn)職稱考試會(huì)涉及的內(nèi)容,為了幫助各位考生了解,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家搜集整理如下:
瑞氏染色法:
1.瑞氏染料 由酸性染料伊紅(E-)和堿性染料亞甲藍(lán)(M+)組成。伊紅通常為鈉鹽,有色部分為陰離子。亞甲藍(lán)(又稱美藍(lán))為四甲基硫堇染料,有對(duì)醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽,即氯化美藍(lán),有色部分為陽(yáng)離子。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級(jí)染料(即天青)。將適量伊紅、美藍(lán)溶解在甲醇中,即為瑞氏染料。甲醇的作用:一是溶解美藍(lán)和伊紅;二是固定細(xì)胞形態(tài)。
2.染色原理 既有物理的吸附作用,又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同,對(duì)各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色或藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫紅色,稱為嗜中性物質(zhì);原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞胞質(zhì)、核仁含較多酸性物質(zhì),染成較濃厚的藍(lán)色;中幼紅細(xì)胞既含酸性物質(zhì),又含堿性物質(zhì),染成紅藍(lán)色或灰紅色;完全成熟紅細(xì)胞,酸性物質(zhì)徹底消失后,染成粉紅色。
3.pH值的影響:細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì),由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液pH而定,在偏酸性環(huán)境中正電荷增多,易與伊紅結(jié)合,紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞染色偏紅,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色或不染色;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)結(jié)合,所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色,顆粒呈深暗,嗜酸性顆粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性顆粒偏粗,呈紫黑色。稀釋染液必須用緩沖液,沖洗用水應(yīng)近中性,否則可導(dǎo)致細(xì)胞染色反應(yīng)呈色異常,形態(tài)難以識(shí)別,甚至錯(cuò)誤。
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