組織和細胞粗抗原的制備是檢驗士考試一個考點，醫(yī)學教育網(wǎng)為了幫助大家復習準備好考試，將組織和細胞粗抗原的制備相關內(nèi)容整理如下：

免疫原多來源于只類及動物的組織或細胞，這些材料在取得可溶性蛋白質(zhì)之前，必須先進行處理，以適合于進一步純化。

1.組織細胞抗原的制備所用組織必須是新鮮的或低溫（＜－40℃）保存的。器官或組織得到后立即去除表面的包膜或結(jié)締組織以及一些大血管。如有條件，臟器應進行灌注，除去血管內(nèi)殘留的血液。處理好的組織用0.05/NaN3生理鹽水洗去血跡及污染物。將洗凈的組織剪成小塊，進行粉碎。粉碎的方法有兩類：①高速組搗碎機法。操作時，將組織加鹽水（約1/2）裝入搗碎機筒內(nèi)，用高速（約1000r/min）間斷進行，每次30～60s，時間過長會產(chǎn)熱。②研磨法?？捎貌Ａ驖{器或乳缽研磨。醫(yī)學教育|網(wǎng)搜集整理玻璃勻漿器是由一內(nèi)壁經(jīng)過磨砂的玻璃管和一根一端為圓柱狀（表面亦經(jīng)磨砂）的磨桿組成，主要經(jīng)過旋轉(zhuǎn)、壓擠將組織粉粹。研磨法可用于韌性較大聽組織，如皮膚、空腔器官等。為了更有效地磨碎組織，有時在研磨時加入淘洗過的海砂。組織勻漿通過2000～3000r/min離心10min后分成兩個部分：沉淀物含有大量的組織細胞和碎片；上清液作為提取可溶性抗原的材料，提取前還要通過1000～2000r/min20～30min的高速離心，以除去微小的細胞碎片，此時上清液應澄清。

2.組織細胞或培養(yǎng)細胞可溶性抗原的制備制備抗原用的細胞包括正常細胞、病理細胞（如腫瘤細胞）或傳代細胞。組織細胞的制備一般通過上述機械破碎后取得。或通過酶消化，所用的酶大多為胃蛋白酶或胰酶。通過酶解將細胞間質(zhì)蛋白消化，獲得游離的單個細胞。細胞抗原一般分為三個組分：膜蛋白抗原、細胞漿抗原（主要為細胞器）和細胞核及核膜抗原。三種抗原的制備皆需將細胞破碎，方法有如下幾種。

（1）反復凍融法：將待破碎的細胞（有時為整塊組織）置－20冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后緩慢地融化。如此反復2次，大部分組織細胞及細胞內(nèi)的顆粒可被融破。

（2）冷熱交替法：在細菌或病毒中提取蛋白質(zhì)及核酸時可用此法。操作時，將材料投入沸水浴中，90℃左右維持數(shù)分鐘，立即置于冰浴中使之迅速冷卻，絕大部分細胞被破壞。

（3）超聲破碎法：對微生物和組織細胞多用此法。處理效果與樣品濃度和使用頻率有關。一般組織細胞皆易破碎，而細菌，尤其是真菌的厚膜孢子則較難打破。超聲波所使用的頻率從1～20kHz不等。同樣要間歇進行，因長時間超聲也會產(chǎn)熱，易導致抗原破壞。一次超聲1～2min，總時間為10～15min.

（4）自溶法：利用組織和微生物的自身酶系，在一定的pH和溫度下，使其細胞裂解。自溶的溫度，對動物組織細胞常選0～4℃，而對微生物常選室溫。自溶時常需加入少量防腐劑，如甲苯或氯仿等，NaN3不宜使用，因其能抑制酶的活力。

（5）溶菌酶處理法：在堿性條件下（pH8.0），溶菌酶可專一破壞細菌細胞壁，適用于多種微生物。除溶菌酶外，蝸牛酶、纖維素酶等也可用于消化細菌和組織細胞。

（6）表面活性劑處理法：常用的有十二烷基吡啶、支氧膽酸鈉等。因效果較差，已少應用。