直接鏡檢或抗原檢測呼吸道分泌物中檢測出非典型病原可直接、迅速確診,但敏感性低。支原體不能用革蘭染色鑒別,直接免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等檢測抗原缺乏敏感性;衣原體檢測也缺乏特異方法。直接免疫熒光法檢測呼吸道、胸水等標本,軍團菌檢測敏感性達70%.軍團菌有一種熱穩(wěn)定及有抗胰蛋白酶活性抗原,其血清濃度低,濃縮尿液濃度可提高30~100倍,易被檢出。該法特異性100%,敏感性90%,常用的有放射免疫法(RIA)、免疫層析法(ICT)、直接熒光抗體法(DFA)等,3h內(nèi)可獲得軍團菌尿抗原檢測結(jié)果。發(fā)病后3天即可陽性,可持續(xù)2個月,甚至超過半年。軍團菌抗原出現(xiàn)早(早于IgM),可避免早期特異性治療影響抗體形成、免疫低下使免疫球蛋白水平達不到診斷標準等造成血清學假陰性,有助于早期診斷,但不能區(qū)分新發(fā)和既往感染,可結(jié)合血清IgM判斷。軍團菌尿抗原檢測僅對軍團菌1型(約占軍團菌的70%)有效。
病原培養(yǎng)
非典型病原體的培養(yǎng)均較為困難,肺炎支原體在不良環(huán)境中非常脆弱,需及時送檢并接種于專用細胞培養(yǎng)基。其生長緩慢,陽性結(jié)果需4~20天,陰性報告則需6周,培養(yǎng)陽性時仍需結(jié)合臨床表現(xiàn)確診。
肺炎衣原體培養(yǎng)需選擇特定細胞株,并通過微量免疫熒光(MIF)確認,3~7天可有結(jié)果。在排除支原體污染等后,分離培養(yǎng)陽性可確診衣原體感染。
軍團菌培養(yǎng)通常需1周,陽性結(jié)果有確診價值。軍團菌對生長條件有特殊要求,生長時需L-半胱氨酸和鐵鹽,從有機化合物中攝取營養(yǎng),可利用氨基酸作為能量和碳源。目前公認陽性率高的培養(yǎng)基仍是活性碳酵母浸膏(BCYE)瓊脂培養(yǎng)基。近年來由于更簡便的檢測方法及非標準改良培養(yǎng)基的廣泛應用使培養(yǎng)陽性率下降醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理。
血清學檢查
血清學檢測靈敏性、特異性均較好,但對部分早期患者或免疫力低下患者,敏感性較差。
支原體IgM抗體陽性是急性感染標志,但再次感染IgM可陰性;IgG在1個月后達峰值,持續(xù)數(shù)年,可用于流行病學調(diào)查。
血清學檢查是診斷衣原體感染的主要手段。微量免疫熒光法可鑒別IgM和IgG,并區(qū)分急性和既往感染。初次感染者IgM在發(fā)病后1周出現(xiàn),可持續(xù)6個月;而IgG則在感染后6~8周出現(xiàn)。再次感染后一般無IgM,而IgG滴度可在1周內(nèi)升至1:512.類風濕因子陽性者可出現(xiàn)假陽性。診斷標準為雙份血清抗體滴度呈4倍或以上增高;或IgM≥1:32,IgG≥1:512為急性感染,1:16≤IgG<1:512為既往感染。ELISA檢測血清抗體特異性和敏感性也很高,在排除類風濕因子影響后診斷價值很高。
軍團菌感染后1周開始出現(xiàn)IgM抗體,2周后出現(xiàn)IgG抗體。間接免疫熒光法(IFA)檢查雙份血清抗體滴度呈4倍或以上增高、或≥1:128為急性感染??贵w高效價出現(xiàn)需要一定時間,發(fā)病1周后約有1/4的患者結(jié)果陽性;銅綠假單胞菌、結(jié)核菌等可出現(xiàn)假陽性,但效價不高。
特異性核酸檢測
PCR可檢測痰液、胸水、組織等標本,靈敏度和特異性很高。其關(guān)鍵是選擇特異引物,缺點是容易污染、存在假陽性和假陰性可能、操作過程尚需標準化和規(guī)范化。