石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)是組織結(jié)構(gòu)保存良好,在病理和回顧性研究中有較大的實(shí)用價(jià)值,能切連續(xù)薄片,組織結(jié)構(gòu)清晰,抗原定位準(zhǔn)確。用于免疫組化技術(shù)的石蠟切片制備與常規(guī)制片略有不同:①脫水、透明等過程應(yīng)在4℃下進(jìn)行,以盡量減少組織抗原的損失。②組織塊大小應(yīng)限于2cm×1.5cm×0.2cm,使組織充分脫水、透明、浸蠟。③浸蠟、包埋過程中,石蠟應(yīng)保持在60℃以下,以溶點(diǎn)低的軟蠟最好(即低溫石蠟包埋)。
石蠟切片為常規(guī)制片技術(shù),切片機(jī)多為輪轉(zhuǎn)式,切片厚度2~7μm,應(yīng)用范圍廣,不影響抗體的穿透性,染色均勻一致。由于甲醛固定、有機(jī)熔劑和包埋劑對(duì)組抗原有一定的損害及遮蔽,使抗原特征發(fā)生改變。有人報(bào)告經(jīng)蛋白酶消化,可以改善光鏡免疫組化染色強(qiáng)度,常用的有胰蛋白酶、鏈霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。石蠟切片醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理應(yīng)入37℃恒溫箱過夜,這樣烤片可減少染色中脫片現(xiàn)象,切片如需長(zhǎng)期貯存,可存放于4℃冰箱內(nèi)備用。
石蠟切片優(yōu)點(diǎn)較多,但在制片過程中要經(jīng)過酒精、二甲苯等有機(jī)溶劑處理,組織內(nèi)抗原活性失去較多,有人采用冷凍干燥包埋法,可以保存組織內(nèi)可溶性物質(zhì),防止蛋白變性和酶的失活,從而減少了抗原的丟失。該法是將新鮮組織低溫速凍,利用冷凍干燥機(jī)在真空、低溫條件下排除組織內(nèi)水分,然后用甲醛蒸氣固定干燥的組織,最后將組織浸蠟、包埋、切片。此法可用于免疫熒光標(biāo)記、免疫酶標(biāo)記及放射自顯影。