應(yīng)用于光鏡的免疫組織化學(xué)染色的切片厚度一般要求5μm左右，神經(jīng)組織的研究要求切片厚度在20-100μm，有利于追蹤神經(jīng)纖維的走行。

　　1.冰凍切片：是免疫組織化學(xué)染色中最常用的一種切片方法。其最突出的優(yōu)點(diǎn)是能夠較完好地保存多種抗原的免疫活性，尤其是細(xì)胞表面抗原更應(yīng)采用冰凍切片。新鮮的組織及已固定的組織均可作冰凍切片。

　　冰凍時，組織中水分易形成冰晶，往往影響抗原定位。一般認(rèn)為冰晶少而大時，影響較小，冰晶小而多時，對組織結(jié)構(gòu)損害較大，在含水量較多的組織中上述現(xiàn)象更易發(fā)生。冰晶的大小與其生長速率成正比，而與成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的數(shù)量愈多則愈小，對組織結(jié)構(gòu)影響愈嚴(yán)重。因此，應(yīng)盡量降低冰晶的數(shù)量。Fish認(rèn)為冰醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理凍開始時，冰晶成核率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-33℃，從-30℃降至-43℃之間，成核率急劇增加達(dá)1018，然后再減慢?；谏鲜隼碚摽刹扇∫韵麓胧p少冰晶的形成。

　　2.石蠟切片：其優(yōu)點(diǎn)是組織結(jié)構(gòu)保存良好，在病理和回顧性研究中有較大的實(shí)用價值，能切連續(xù)薄片，組織結(jié)構(gòu)清晰，抗原定位準(zhǔn)確。用于免疫組化技術(shù)的石蠟切片制備與常規(guī)制片略有不同：①脫水、透明等過程應(yīng)在4℃下進(jìn)行，以盡量減少組織抗原的損失。②組織塊大小應(yīng)限于2cm×1.5cm×0.2cm，使組織充分脫水、透明、浸蠟。③浸蠟、包埋過程中，石蠟應(yīng)保持在60℃以下，以溶點(diǎn)低的軟蠟最好（即低溫石蠟包埋）。

　　石蠟切片為常規(guī)制片技術(shù)，切片機(jī)多為輪轉(zhuǎn)式，切片厚度2～7μm，應(yīng)用范圍廣，不影響抗體的穿透性，染色均勻一致。由于甲醛固定、有機(jī)熔劑和包埋劑對組抗原有一定的損害及遮蔽，使抗原特征發(fā)生改變。有人報告經(jīng)蛋白酶消化，可以改善光鏡免疫組化染色強(qiáng)度，常用的有胰蛋白酶、鏈霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。石蠟切片醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理應(yīng)入37℃恒溫箱過夜，這樣烤片可減少染色中脫片現(xiàn)象，切片如需長期貯存，可存放于4℃冰箱內(nèi)備用。

　　石蠟切片優(yōu)點(diǎn)較多，但在制片過程中要經(jīng)過酒精、二甲苯等有機(jī)溶劑處理，組織內(nèi)抗原活性失去較多，有人采用冷凍干燥包埋法，可以保存組織內(nèi)可溶性物質(zhì)，防止蛋白變性和酶的失活，從而減少了抗原的丟失。該法是將新鮮組織低溫速凍，利用冷凍干燥機(jī)在真空、低溫條件下排除組織內(nèi)水分，然后用甲醛蒸氣固定干燥的組織，最后將組織浸蠟、包埋、切片。此法可用于免疫熒光標(biāo)記、免疫酶標(biāo)記及放射自顯影。

　　3.振動切片：用振動切片機(jī)，可以把新鮮組織（不固定不冰凍）切成厚片20～10μm，以漂浮法在反應(yīng)板進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，然后在解剖顯微鏡下檢出免疫反應(yīng)陽性部位，修整組織進(jìn)行后固定，最后按電鏡樣品制備、脫水、包埋、超薄切片、染色觀察等。組織不冰凍，無冰晶形成和組織抗原破壞，在免疫組化染色前避免了組織脫水、透明、包埋等步驟對抗原的損害，能較好地保留組織內(nèi)脂溶性物質(zhì)和細(xì)胞膜抗原，主要用于顯示神經(jīng)系統(tǒng)抗原分布研究。醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理這種包埋前染色，尤其適用于免疫電鏡觀察。

　　4.塑料切片：塑料包埋切片常用包埋劑有甲基丙烯酸鹽類（GMA）及環(huán)氧樹脂類（Epon 812，618），其優(yōu)點(diǎn)是可以同時作光鏡和電鏡檢測，能相互對照所查抗原，定位準(zhǔn)確。塑料包埋切片可切出比石蠟切片更薄的切片，光鏡切片可薄至0.5～2μm，故稱半薄切片。GMA保存抗原較好，不與組織產(chǎn)生共聚合，但形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)欠佳醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理。環(huán)氧樹脂如Fpon和Araldite能較好地保存形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，但在聚合過程中易和組織起作用，改變抗原結(jié)構(gòu)。塑料包埋切片由于處理程序繁多，抗原活性易丟失。同時半薄切片進(jìn)行免疫染色時，抗血清不易穿透樹脂，因此，塑料切片主要用于免疫電鏡的超微切片前定位。包埋前染色的標(biāo)本，切片薄切片后不需染色，直接在相差顯微鏡下觀察免疫反應(yīng)部位呈黑點(diǎn)狀，定位后進(jìn)一步作超薄切片，這樣，可以明顯提高免疫電鏡陽性檢出率。