1.放射免疫分析(RIA)基本原理:其原理為標(biāo)記抗原(Ag*)和非標(biāo)記抗原(Ag)對有限量特異性抗體競爭性結(jié)合反應(yīng)。
Ag*是試劑成分,而Ag是待測抗原,Ab也是試劑中成分。 Ag*和Ab的量是固定微量的,而待測的Ag量是不固定的。
解釋:如果將Ag*-Ab復(fù)合物與游離(剩余的)Ag*分開,分別測定它們的放射性,就可算出結(jié)合態(tài)的標(biāo)記抗原(B:Ag*-Ab復(fù)合物中的Ag*)與游離態(tài)的標(biāo)記抗原(F:單獨、剩余的Ag*)的比值(B/F),或算出結(jié)合率[B/(B+F)],它們與待測Ag量呈函數(shù)關(guān)系(反比關(guān)系)。
2.劑量反應(yīng)曲線:劑量反應(yīng)曲線又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線,即用標(biāo)準(zhǔn)物濃度(Ag)對結(jié)合率[B/(B+F)]作圖。在RIA中被測定物質(zhì)的濃度(量)可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得;同時標(biāo)準(zhǔn)曲線又是驗證方法的靈敏度、檢驗抗血清質(zhì)量和鑒定標(biāo)準(zhǔn)品純度的主要依據(jù)。隨著計算機(jī)的普及,可通過計算機(jī)的放免處理程序來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.測定方法:RIA測定方法分三個步驟即:①待測標(biāo)本中未標(biāo)記抗原,標(biāo)記抗原和抗體進(jìn)行競爭抑制反應(yīng);②將標(biāo)記抗原和抗體相結(jié)合的復(fù)合物(B)和未結(jié)合的標(biāo)記抗原(F)的分離(分離方法有第二抗體法、聚乙二醇沉淀法、PR法、活性炭吸附法等);③對B進(jìn)行放射性強(qiáng)度的測定(B為標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物,F(xiàn)為游離標(biāo)記抗原)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理查得待測抗原濃度。
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