免疫濁度法本質(zhì)上屬于液體內(nèi)沉淀反應(yīng)，其特點(diǎn)是將現(xiàn)代光學(xué)測(cè)量?jī)x器、自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)和免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合，可進(jìn)行液體中微量抗原、抗體及小分子半抗原定量檢測(cè)。

　?。ㄒ唬?strong>免疫濁度法原理

　　當(dāng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體在兩者比例合適時(shí)，抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度，如形成的復(fù)合物增加，反應(yīng)液的濁度隨之增加，與一系列的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出受檢物的含量。

　　按照儀器設(shè)計(jì)的不同分為透射比濁儀測(cè)定法和散射比濁儀測(cè)定法。測(cè)定方法又可分為速率法和終點(diǎn)法。

　　1.免疫透射比濁法：

　　根據(jù)郎伯-比爾（Lambert-Beer）定律，當(dāng)光線通過抗原抗體反應(yīng)系統(tǒng)時(shí)，由于溶液中存在抗原抗體復(fù)合物，光線被吸收。吸收的量和復(fù)合物的量成正比。利用透射比濁儀測(cè)量出由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理其濁度以吸光度A表示，A值反映了入射光與透射光的比率。

　　C：溶液濃度

　　K：常數(shù)或cd

　　c：分子吸光系數(shù)

　　d：光路長(zhǎng)

　　2.免疫速率散射比濁法：

　　其原理是指一定波長(zhǎng)的光通過溶液遇到抗原抗體復(fù)合物時(shí)，光線被折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)。偏轉(zhuǎn)角度可以從0-90°，這種偏轉(zhuǎn)的角度可因光線的波長(zhǎng)和復(fù)合物大小不同而有所區(qū)別。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比，即待測(cè)抗原越多，形成的復(fù)合物也越多，散射光也越強(qiáng)。同時(shí)也和散射夾角成正比，和波長(zhǎng)呈反比。

　　測(cè)定方法有終點(diǎn)法和速率法兩種。

　　終點(diǎn)法是在抗原-抗體反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，即復(fù)合物形成后作用一定時(shí)間，通常是30-60min，復(fù)合物濁度不再受時(shí)間的影響，但又必須在聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前進(jìn)行濁度測(cè)定。

　　速率法是在抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的過程中，在單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合的速度。速率法是測(cè)最大反應(yīng)的速度，即反應(yīng)達(dá)到頂峰時(shí)的峰值。抗原抗體結(jié)合反應(yīng)在幾十秒內(nèi)得出結(jié)果，峰值的高低與抗原的量成正比，峰值出現(xiàn)的時(shí)間和抗體濃度、抗原抗體的親和力直接相關(guān)。速率法的靈敏度和特異性都比終點(diǎn)法好。

　　但是，必須指出的是對(duì)免疫濁度法存在難以克服的鉤狀效應(yīng)。即在定量抗體中加入抗原量達(dá)到最佳比例時(shí)，形成的IC量最大，反應(yīng)速度最快。如繼續(xù)加入抗原，形成IC的量不但不再增加，反而減少；反之，在定量抗原中加入抗體，在抗體過量時(shí)也會(huì)產(chǎn)生同樣的現(xiàn)象。這種后帶（抗原過量）和前帶（抗體過量），統(tǒng)稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect）。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理鉤狀效應(yīng)可以產(chǎn)生假象的弱陽性或假陰性結(jié)果。

　?。ǘ?strong>與免疫濁度法測(cè)定密切相關(guān)的因素有：

　　1.抗原與抗體的比例：理想狀態(tài)是抗原與抗體比例合適全部結(jié)合，事實(shí)上有困難，根據(jù)Heidelberger曲線理論，反應(yīng)液中保持抗體過量時(shí)，復(fù)合物隨抗原量的增加遞增至抗原與抗體兩者比例最合適時(shí)達(dá)高峰，因此免疫濁度法中保持抗體過量；

　　2.抗體的質(zhì)量：應(yīng)是特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)、并使用R型抗血清；

　　3.抗原抗體反應(yīng)的溶液：關(guān)鍵是pH及離子種類，通常用磷酸鹽緩沖液作反應(yīng)液；

　　4.增濁劑的應(yīng)用：通常用非離子型親水劑，如聚乙二醇（PEG）、吐溫-20等。