純化的目的是盡量去除抗血清中與目的抗體不相關的成分,防止與特定抗原反應時起干擾作用。最常見的純化方式是提取特異性IgG或單價特異性抗血清。
一、特異性IgG抗血清制備
首先用硫酸銨或硫酸鈉鹽析法粗提丙種球蛋白,再進一步純化,常用的方法有:
1.離子交換層析法:離子交換劑有DEAE纖維素和QAE纖維素。
2.凝膠過濾:通過多孔凝膠介質達到分離目的。
3.親和層析法:采用純化抗原或粗提抗原交聯(lián)的sepharose 4B的層析柱來制備。
4.酶解法 [如制備F(ab’)2]:醫(yī)學教*育網(wǎng)整理片段用胃蛋白酶水解制備。
二、單價特異性抗血清制備
主要通過親和層析法(交叉雜抗原與瓊脂糖珠4B交聯(lián)制成層析柱)和吸附法(用雙功能試劑與抗原交聯(lián),制成固相吸附劑)除去雜抗體。