1 資料與方法
1.1 標(biāo)本來源 選取2006年11~12月我院住院及門診患者血清樣本91份,其中男44份,女47份;年齡13~79歲,平均年齡47.7歲。所有病例選擇均符合2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)指定的《病毒性肝炎防治方案》中的診斷標(biāo)準(zhǔn),并排除合并感染其他病毒性肝炎,排除心、腦、腎、肺等器官疾病及高血壓、糖尿病等。
1.2 標(biāo)本檢測(cè)
1.2.1 ELISA檢測(cè)的簡要步驟:取樣本血清100 μl,加預(yù)處理液50 μl,56℃水浴30 min。酶標(biāo)板每孔加入100 μl樣品稀釋液(包括空白,陰、陽對(duì)照孔,空白孔需加入200 μl樣品稀釋液);加入100 μl陰、陽對(duì)照孔于相應(yīng)孔,其余孔各加入100 μl經(jīng)預(yù)處理后的待測(cè)樣品;37℃水浴振蕩60 min。洗板6次。每孔加200 μl酶結(jié)合物,37℃水浴30 min,再洗板。最后顯色劑A、B液各100 μl,37℃水浴避光顯色10 min后加50 μl終止液。反應(yīng)終止10 min內(nèi),以酶標(biāo)儀450 nm波長測(cè)定各孔OD值。
臨界值(cut off)確定:陽性對(duì)照每孔OD值>0.6,陰性對(duì)照孔OD值<0.1時(shí),測(cè)定結(jié)果有效,其臨界值(cut off)為:陰性對(duì)照孔平均OD值+0.06。
結(jié)果判定:待檢測(cè)樣品的OD值>臨界值判定為HCV抗原陽性,<臨界值判定為HCV抗原陰性。
1.2.2 每份血清同時(shí)用ELISA法檢測(cè)抗HCV,檢測(cè)試劑由上海科華試劑公司提供。
1.2.3 每份血清用ABI PRISM 7000PCR儀熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)(PCR)檢測(cè)HCV RNA含量,檢測(cè)試劑由廣州達(dá)安基因股份有限公司提供。
1.2.4 每份血清用日本Olympus Au 2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定ALT濃度,檢測(cè)試劑由第一化學(xué)藥品株式會(huì)社提供。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SAS 8.2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)數(shù)資料比較采用進(jìn)行χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 62份HCV抗體陽性標(biāo)本中抗原的檢出率為22.6%;29份HCV抗體陰性標(biāo)本中抗原的檢出率為6.9%。兩種樣品檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.128,P<0.05)。
2.2 16份抗原陽性標(biāo)本中HCV RNA陽性14份,75份抗原陰性標(biāo)本中有2份RNA陽性者,二者符合率是70.3%。
2.3 29份抗體陰性標(biāo)本中檢出抗原陽性2份,HCV RNA證實(shí)均為陽性。
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