在30多種補(bǔ)體成分中,主要檢測C3、CA、C1q、B因子和C1酯鎂抑制物。測定方法分為免疫溶血法及免疫化學(xué)法。
1.免疫溶血法
溶血法主要根據(jù)抗原與其特異性抗體(IgG、IgM型)結(jié)合后可激活補(bǔ)體的經(jīng)典途徑,導(dǎo)致細(xì)胞溶解。該方法中抗原為SRBC,抗體為兔或馬抗SRBC的抗體,即溶血素。將兩者組合作為指示系統(tǒng)參與反應(yīng)。
試驗(yàn)中有兩組補(bǔ)體參與,一組是作為實(shí)驗(yàn)反應(yīng)系統(tǒng)的補(bǔ)體,此類試劑可選用先天缺乏某單一補(bǔ)體成分的動(dòng)物或人血清,如某些人可天然缺乏C2、豚鼠缺C5、家兔缺C6;也可利用化學(xué)試劑人為滅活正常血清中某種成分制備缺乏該成分的補(bǔ)體試劑,加入致敏SRBC(檢測經(jīng)典途徑補(bǔ)體成分用)或總紅細(xì)胞RRBC(檢測替代途徑補(bǔ)體成分用)指示系統(tǒng)后,此時(shí)由于補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)體系中缺乏某種補(bǔ)體成分,不能使補(bǔ)體連續(xù)激活,不發(fā)生溶血。
另一組為待測血清中的補(bǔ)體,當(dāng)加入待測血清,使原來缺乏的成分得到補(bǔ)充,補(bǔ)體成分齊全,級聯(lián)反應(yīng)恢復(fù),產(chǎn)生溶血。溶血程度與待測補(bǔ)體成分活性有關(guān),仍以50%溶血為終點(diǎn)。
免疫溶血法無須特異儀器與設(shè)備,快速,但敏感性較低,醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理影響因素多。該法不是檢測某補(bǔ)體成分的具體含量,而是檢測其活性,在某些需了解該成分活性情況下,本試驗(yàn)適用。
2.免疫化學(xué)法
免疫化學(xué)法分為單向免疫擴(kuò)散法、火箭免疫電泳、透射比濁法和散射比濁法。前兩種方法已逐漸趨于淘汰,后兩種方法通過儀器對補(bǔ)體的C3、C4、B因子等單個(gè)成分進(jìn)行測定。待測血清標(biāo)本的C3、C4成分適當(dāng)稀釋后與檢測用相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物,反應(yīng)介質(zhì)中的PEG可使該復(fù)合物沉淀,儀器對復(fù)合物產(chǎn)生的光散射或透射信號進(jìn)行自動(dòng)檢測,并換算成所測成分的濃度單位。
自動(dòng)免疫化學(xué)法檢測補(bǔ)體成分方法簡單、特異、重復(fù)性好,可反映所測補(bǔ)體成分的絕對值,并能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化流程管理和質(zhì)控,是當(dāng)前主要檢測方法。
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