標(biāo)本采集和涂片制作方法是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技師考試需要了解的知識(shí)點(diǎn)，醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理了相關(guān)內(nèi)容，希望對(duì)廣大復(fù)習(xí)備考的考生有所幫助。

標(biāo)本采集和涂片制作方法：

一、標(biāo)本采集

正確地采集標(biāo)本是細(xì)胞學(xué)診斷的基礎(chǔ)和關(guān)鍵之一，故要準(zhǔn)確地選擇部位，盡可能在病變區(qū)直接采集細(xì)胞。采集的標(biāo)本必須保持新鮮，盡快制得，以免細(xì)胞自溶或腐敗。盡可能避免血液、粘液等混入標(biāo)本內(nèi)，采集方法應(yīng)簡便，操作輕柔，避免病人痛苦和引起嚴(yán)重并發(fā)癥及促進(jìn)腫瘤擴(kuò)散，下面介紿幾種常用的標(biāo)本采集方法。

（一）直視采集法

外陰、陰道、陰道穹窿、宮頸、口腔、肛管、鼻腔、鼻咽部、眼結(jié)膜及皮膚等部位，可以直接用刮片刮取、吸管吸取、刷洗、食管、胃、直腸、氣管和肺內(nèi)支氣管則使用纖維內(nèi)鏡在病灶處直接刷取細(xì)胞制片。

（二）自然分泌液的采集法

1．痰液涂片檢查：痰興高采烈為支氣管等呼吸的分泌物，對(duì)支氣管肺癌和其它呼吸道疾病細(xì)胞學(xué)診斷具有重要價(jià)值。

2．尿液涂片檢查：收集尿液中脫落的泌尿道細(xì)胞成分，作泌尿道腫瘤和某些疾病的細(xì)胞學(xué)診斷。

3．乳頭溢涂片檢查：用于導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤和乳腺癌細(xì)胞學(xué)檢查。

4．前列腺液涂片檢查：采用前列腺按摩法取得分泌物，作前列腺細(xì)胞學(xué)診斷。

（三）灌洗洗

向空腔器官或腹腔、盆腔（剖腹探查時(shí)）灌注一定量生理鹽水沖洗，使其細(xì)胞成分脫落于液體中，收集灌洗液離心制片，作細(xì)胞學(xué)檢查。

（四）磨擦法

利用磨擦工具在病變部位磨擦，將擦取物直接涂片。常用磨擦工具有海棉磨擦器、線網(wǎng)套、氣囊等。可分別用于鼻咽部、食管和胃部病灶的取材。

（五）針穿抽吸法

當(dāng)有胸腔、腹腔、心包腔及關(guān)節(jié)腔積液時(shí)，可用針穿抽吸部分積液作細(xì)胞學(xué)檢查。此外某些深部組織器官，如淋巴結(jié)、甲狀腺、軟組織、肝等亦可作細(xì)針穿刺吸取部分細(xì)胞進(jìn)行涂片診斷。

二、涂片制作方法

（一）涂片前準(zhǔn)備工作及涂片方法

1．涂片前準(zhǔn)備工作

（1）保證標(biāo)本新鮮，取材后盡快制片。

（2）涂操作要輕巧，避免擠壓以防止損傷細(xì)胞。涂片要均勻，厚薄要適度，太厚細(xì)胞堆疊，太薄細(xì)胞過少，均影響診斷。

（3）玻片要清潔無油漬，先用硫酸洗滌液浸泡沖洗，再用75%乙酸浸泡。

（4）含蛋白質(zhì)的標(biāo)本可直接涂片，缺乏蛋白質(zhì)的標(biāo)本，涂片前先在玻片上涂薄層粘附劑，以防止染色時(shí)細(xì)胞脫落，常用粘附劑為蛋白甘油，由等量生雞蛋白和甘油混合而成。

（5）每位患者的標(biāo)本至少涂兩張玻片，以避免漏診。涂片后立即在玻片一端標(biāo)上編號(hào)。

2．涂片制備方法

（1）推片法：用于稀薄的標(biāo)本，如血液，胸、腹水等。取離心后標(biāo)本一小滴滴在玻片偏右側(cè)端，用推片用30度夾角將玻片上檢液輕輕向左推。

（2）涂抹法：適用于稍稠的檢液，如鼻咽部標(biāo)本。用竹棉簽在玻片上涂布，由玻片中心經(jīng)順時(shí)針方向外轉(zhuǎn)圈淫抹；或從玻片一端開始平行涂抹，涂抹要均勻，不宜重復(fù)。

（3）壓拉涂片法：將標(biāo)本夾于橫豎交叉的兩張玻片之間，然后移動(dòng)兩張玻片，使之重疊，再邊壓邊拉，獲得兩張涂片。該法適用于較粘稠標(biāo)本，如痰液。

（4）吸管推片法：用吸和將標(biāo)本滴在玻片一端，然后將滴管前端平行置于標(biāo)本滴上，平行向另一端均速移動(dòng)滴管即可推出均勻薄膜。此法亦適用于胸、腹水標(biāo)本。

（5）噴射法：用配細(xì)針頭的注射器將標(biāo)本從左至右反復(fù)均勻地噴射在玻片上，此法適用于各種吸取的液體標(biāo)本。

（6）印片法：將切取的病變組織用手術(shù)切開，立即將切面平放在玻片上，輕輕按印。此方法為活體組織檢查的輔助方法。

（二）涂片的固定

固定（fication）的目的是保持細(xì)胞自然形態(tài)，防止細(xì)胞自溶和細(xì)菌所致的腐敗；固定液能沉淀和凝固細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和破下細(xì)胞內(nèi)溶酶體酶，使細(xì)胞不但保持自然形態(tài)，而且結(jié)構(gòu)清晰，易于著色。因此標(biāo)本愈新鮮，固定愈及時(shí)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)愈清晰，染色效果愈好。

1．固定液：細(xì)胞學(xué)檢查常用的固定液有下列三種：第一種乙醚酒清固定液：該固定液滲透明性較強(qiáng)，固定效果好適用于于一般細(xì)胞學(xué)常規(guī)染色；二種是氯仿酒精固定液：又稱卡諾氏固定液。其優(yōu)點(diǎn)同上；第三種95%酒精固定液：適用于大規(guī)模防癌普查。制備簡單。但滲透作用稍差。

2．固定方法

（1）帶濕固定：涂片后未待標(biāo)本干燥即行固定的方法稱帶濕因定。此法因定細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，染色新鮮。適用于巴氏或HE染色。痰液、陰道分泌物及食管拉網(wǎng)涂片等常任常用此方法。

（2）干燥因定：涂片后未待其自然干燥，再行固定。適用于稀薄標(biāo)本如尿液、胃沖洗液等，也適用于于瑞特染色和姬姆薩染色。

3．固定時(shí)間：一般為15-30min.含粘液較多標(biāo)本，如痰液、陰道分泌物、食管拉網(wǎng)等因定時(shí)間在適當(dāng)延長；尿液、胸、腹水等涂片不含粘液，固定時(shí)間可酌情縮短。

（三）涂片的染色

1．染色的目的和原理：染色的日的是借助于一種或多種染料，使組織和細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)分別著不同的染色，這樣在顯微鏡下能清楚地觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，作出正確判斷。

組織細(xì)胞染色原理至今尚無滿意的解釋，可能是物理作用，也可能是化學(xué)作用，或者是兩者綜合作用的結(jié)果。

染色的物理作用是利用毛細(xì)管現(xiàn)象，滲透、吸收和吸附作用，使染料的色素顆粒牢固地進(jìn)入組織細(xì)胞，并使其顯色。

染色的化學(xué)作用是滲入組織細(xì)胞的染料與其相應(yīng)的物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生有色的化合物。

各染料都具有兩種性質(zhì)，即產(chǎn)生顏色；征收被組織形成親和力。這兩種性質(zhì)主要由發(fā)色基因和助色基因所產(chǎn)生的。

發(fā)色基團(tuán)：苯的衍生物具有可見光區(qū)吸收帶。這些衍生物顯不的吸收帶與其價(jià)鍵的不穩(wěn)定性有關(guān)，如對(duì)苯二酚為無色，當(dāng)其氧化后失去兩個(gè)氫原子，它的分子或則變?yōu)橛悬S色的對(duì)醌，這種產(chǎn)生顏色的醌式環(huán)稱為發(fā)色基團(tuán)。若一種化合物含有幾個(gè)環(huán)，只要其中有一個(gè)醌式環(huán)就會(huì)發(fā)出顏色，稱此發(fā)色基團(tuán)為色原（chromogen）醫(yī)學(xué)`教育網(wǎng)搜集整理。

助色基團(tuán)：是一種能使化合物以生電離作用的輔助原子團(tuán)（酸堿性基團(tuán)）。它能使染色的色澤進(jìn)一步加深，并使其與被染色組織具有親和力。

助色基團(tuán)的性質(zhì)決定染料是酸性堿性。堿性染料具有堿性助色基團(tuán)，在溶媒中產(chǎn)生的帶色部分為帶正電荷的陽離子，吻與組織細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合而顯色。如細(xì)胞核內(nèi)的主要化學(xué)成分脫氧化核糖核酸易被蘇木素染成紫藍(lán)色，稱嗜堿性。酸性染料具有酸性用力色基團(tuán)，在溶酶中產(chǎn)生帶色部分為陰離子，易與組織細(xì)胞內(nèi)帶正電荷部分結(jié)合而顯色，此性質(zhì)被稱為嗜酸性，如細(xì)胞漿內(nèi)訂成分為蛋白質(zhì)，易與伊紅或橘黃結(jié)合呈紅色或橘黃色。

2．常用染色方法：臨床日常工作中較為常用的染色方法有下列3種：

（1）巴氏染色法：本法染色特點(diǎn)是細(xì)胞具有多色性顏色，色彩鮮艷多彩。涂片染色的透明性好，胞質(zhì)顆粒分明，胞核結(jié)構(gòu)清晰，如鱗狀上皮過度角化細(xì)胞胞質(zhì)呈橘黃色；角化細(xì)胞顯粉紅色；而角化前細(xì)胞顯淺綠色或淺藍(lán)色，適用于上皮細(xì)胞染色或觀察陰道涂片中激素水平對(duì)上皮細(xì)胞的影響。此方法的缺點(diǎn)是染色程序比較復(fù)雜。

（2）蘇木精—伊紅（hemotoxylineosin，HE）染色法：該方法染色透明度好，核與胞質(zhì)對(duì)比鮮明。染色步驟簡便，效果穩(wěn)定。適用于痰液涂片，觖質(zhì)核呈紫藍(lán)色，胞質(zhì)淡玫瑰紅色，紅細(xì)胞呈淡朱紅色。

（3）瑞特—吉姆薩染色法（wrightgiemsaatain）；本方法多用于血液，骨髓細(xì)胞學(xué)檢查。胞質(zhì)內(nèi)顆粒與核安危質(zhì)結(jié)構(gòu)顯示較清晰。操作簡便。