珠蛋白合成異常的檢驗(yàn)如何進(jìn)行呢?
珠蛋白合成異常的檢驗(yàn)如何進(jìn)行呢?快來跟著小編了解一下吧!
(1)血紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能
1)血紅素 血紅素是Hb、肌紅蛋白、多種酶(如過氧化氫酶)和多種細(xì)胞色素的輔基,其合成的場(chǎng)所主要在骨髓內(nèi)的幼紅細(xì)胞和肝細(xì)胞線粒體。與臨床有關(guān)的是尿卟啉、糞卟啉和原卟啉,當(dāng)卟啉代謝障礙時(shí),血紅素合成不全,并可能產(chǎn)生卟啉病。
2)珠蛋白 人類的珠蛋白肽鏈有α、β、γ、δ、ε、ζ鏈;這些肽鏈按四級(jí)結(jié)構(gòu)形成Hb。
3)血紅蛋白的功能 運(yùn)輸O2和CO2。
4)生理性血紅蛋白 幾種正常生理性血紅蛋白在胎兒時(shí)期和出生后有明顯的不同。新生兒期內(nèi)HbF(α2γ2)仍高,以后2~4個(gè)月漸下降,1歲左右接近成人水平。成人血紅蛋白HbA(α2β2)出生后逐漸增多,占95%~97%,HbA2(α2δ2)出生后占1.2%~3.5%。
(2)血紅蛋白異常的檢驗(yàn)
1)血紅蛋白電泳
原理:根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷,等電點(diǎn)不同,在一定的pH緩沖液中,緩沖液的pH大于Hb的等電點(diǎn)時(shí)其帶負(fù)電荷,電泳時(shí)在電場(chǎng)中向陽(yáng)極泳動(dòng),反之,Hb帶正電荷向陰極泳動(dòng)。經(jīng)一定電壓和時(shí)間的電泳,不同的血紅蛋白所帶電荷不同、相對(duì)分子質(zhì)量不同,其泳動(dòng)方向和速度不同,可分離出各自的區(qū)帶,同時(shí)對(duì)電泳出的各區(qū)帶進(jìn)行電泳掃描,可進(jìn)行各種血紅蛋白的定量分析。
參考值:
pH8.6TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳,正常血紅蛋白電泳區(qū)帶:HbA>95%、HbF<2%、HbA2為1.0%~3.1%。pH8.6TEB緩沖液適合于檢出HbA、HbA2、HbS、HbC,但HbF不易與HbA分開,HbH與HbBarts不能分開和顯示,應(yīng)再選擇其他緩沖液進(jìn)行電泳分離。
pH6.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳,主要用于HbH和HbBarts的檢出。HbH等電點(diǎn)為5.6,在pH6.5TEB緩沖液中電泳時(shí)泳向陽(yáng)極,HbBarts則在點(diǎn)樣點(diǎn)不動(dòng),而其余的血紅蛋白都向陰極移動(dòng)。
臨床意義
通過與正常人的血紅蛋白電泳圖譜進(jìn)行比較,可發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶,如HbH、HbE、HbBarts、HbS、HbD和HbC等。
HbA2增多,見于β珠蛋白合成障礙性貧血,為雜合子的重要實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。HbE病時(shí)也在HbA2區(qū)帶位置處增加,但含量很大(在10%以上)。HbA2輕度增加亦可見于肝病、腫瘤和某些血液病。
2)抗堿血紅蛋白測(cè)定
原理:又稱堿變性試驗(yàn)。胎兒血紅蛋白(HbF)具有抗堿和抗酸作用。其抗堿作用比HbA更強(qiáng)。將待檢的溶血液與一定量的NaOH溶液混合,作用1min后加入半飽和硫酸銨中止堿變性反應(yīng)。HbF抗堿變性作用強(qiáng),沒有變性的存在于上清液中,HbA變性沉淀,取上清液于540nm處測(cè)定吸光度,檢測(cè)出HbF的濃度。此試驗(yàn)也稱為堿變性試驗(yàn),其檢測(cè)的是抗堿血紅蛋白,除HbF外,HbBarts和部分HbH也具有抗堿能力,需通過電泳鑒別。
參考值:新生兒<40%,2歲以后至成人<2.5%。
臨床意義:珠蛋白生成障礙性貧血HbF增加,持續(xù)性胎兒血紅蛋白癥HbF高至100%。某些疾病時(shí)HbF相對(duì)增加,包括惡性疾病如放射療法后骨髓纖維化、惡性腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移、急性或慢性白血病、漿細(xì)胞瘤;非惡性疾病有再生障礙性貧血、純紅細(xì)胞再障、PNH、未治療惡性貧血、卟啉病等。
3)異丙醇沉淀試驗(yàn)
原理:不穩(wěn)定血紅蛋白較正常血紅蛋白更容易裂解,在異丙醇這種能降低血紅蛋白分子內(nèi)部的氫鍵的非極性溶劑中,不穩(wěn)定血紅蛋白更快地沉淀。通過觀察血紅蛋白液在異丙醇中的沉淀現(xiàn)象對(duì)不穩(wěn)定血紅蛋白進(jìn)行篩檢。
結(jié)果:正常人血紅蛋白液為陰性(30min內(nèi)不沉淀)。
臨床意義:不穩(wěn)定血紅蛋白(包括HbH)于5min時(shí)出現(xiàn)沉淀,20min內(nèi)沉淀逐漸增加,甚至成絮狀或粗顆粒狀。血液中含有較多HbF、HbH、HbE時(shí)也可出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。
4)紅細(xì)胞包涵體試驗(yàn)
原理:將煌焦油藍(lán)液與新鮮血液一起孵育,不穩(wěn)定血紅蛋白易變性沉淀形成包涵體。
結(jié)果:陰性。
臨床意義:不穩(wěn)定血紅蛋白病、HbH病呈陽(yáng)性。
5)HbA2測(cè)定
原理:同血紅蛋白電泳。
參考值:1.2%~3.5%。
臨床意義:同血紅蛋白電泳。
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