流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求是什么呢？快來跟著小編了解一下吧！

一、免疫檢測樣品制備

（一）新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備：最常用的方法有機(jī)械法、酶處理法、化學(xué)試劑處理法和表面活性劑處理法等方法。

（二）單細(xì)胞懸液的保存：最常用的處理方法有三種：深低溫保存法，乙醇或甲醇保存法，甲醛或多聚甲醛保存法。

二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色

在流式細(xì)胞免疫分析技術(shù)中，被測定的信號參數(shù)主要包括散射光信號和熒光信號兩種，熒光信號來自于細(xì)胞的自發(fā)熒光或被分析細(xì)胞經(jīng)特異性熒光標(biāo)記染色后，在激光束激發(fā)下產(chǎn)生的發(fā)射光。因此，熒光染料的選擇和標(biāo)記染色都是保證熒光信號產(chǎn)生非常關(guān)鍵的技術(shù)指標(biāo)。

（一）免疫熒光標(biāo)記最常用的熒光染料

用于免疫熒光染色的染料需具備以下幾個條件：

熒光染料應(yīng)有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù)；

熒光染料對488nm的激發(fā)光波長有較強(qiáng)的吸收；

發(fā)射光波長與激發(fā)光波長之間應(yīng)有較大的波長差；

容易與被標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合而不影響抗體自身的特異性。

1.異硫氰酸熒光素（FITC）：可產(chǎn)生亮綠色熒光。FITC是免疫熒光標(biāo)記最常用的熒光探針。

2.德州紅：與生物素偶聯(lián)的抗體有很強(qiáng)的親和力，產(chǎn)生紅色熒光。

3.藻膽蛋白類：主要包括藻紅蛋白（PE）、藻青蛋白（PC）、別藻青蛋白（APC）三類。多發(fā)生橙色至紅色熒光。

4.能量傳遞復(fù)合染料

（二）免疫熒光標(biāo)記

1.直接免疫熒光染色：特異性強(qiáng)，熒光標(biāo)記干擾因素少

2.間接免疫熒光染色

3.雙參數(shù)或多參數(shù)分析時熒光抗體的組合標(biāo)記

（三）細(xì)胞自發(fā)熒光

三、免疫膠乳顆粒技術(shù)的應(yīng)用

“液相芯片”技術(shù)是膠乳顆粒在流式細(xì)胞分析中的應(yīng)用，流式微球陣列（CBA）技術(shù)屬于其中的重要代表。

四、流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制

（一）單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制

1.采用適當(dāng)?shù)闹苽浞绞健?/span>

2.用溶血劑處理紅細(xì)胞。

3.實(shí)體組織來源標(biāo)本在制備單細(xì)胞懸液過程中，最好采用機(jī)械法。

4.溫度與pH。

（二）細(xì)胞懸液免疫熒光染色的質(zhì)量控制

1.溫度對熒光染色的影響。

2.pH對熒光發(fā)射強(qiáng)度的影響。

3.熒光染料濃度的控制。

固定劑對免疫熒光染色的影響。

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