非標(biāo)記抗體免疫酶組化染色有哪些方法呢？快來跟著小編了解一下吧！

酶不是標(biāo)記在抗體上，而是首先用酶免疫動(dòng)物，制備效價(jià)高、特異性強(qiáng)的抗酶抗體，通過免疫學(xué)反應(yīng)將抗酶抗體與組織抗原聯(lián)系在一起。該方法避免了酶標(biāo)記時(shí)對抗體的損傷，同時(shí)也提高了方法的敏感性。

（一）酶橋法：抗酶抗體作為第三抗體，通過橋抗體（第二抗體），將特異性識別組織抗原的第一抗體與第三抗體連接起來，形成酶聯(lián)的抗原-抗體復(fù)合物，加底物顯色。

（二）PAP法：PAP法是在酶橋法基礎(chǔ)上的改良。PAP法首先將酶橋法的第三抗體（抗酶抗體）與酶組成可溶性復(fù)合物（PAP復(fù)合物）。該復(fù)合物由2個(gè)抗酶抗體和3個(gè)過氧化物酶分子組成，呈五角形結(jié)構(gòu)，非常穩(wěn)定。通過橋抗體（第二抗體），將特異性識別組織抗原的第一抗體與PAP復(fù)合物的抗酶抗體連接起來，此時(shí)要求特異性第一抗體與第三抗體的動(dòng)物種屬相同。

（三）雙橋PAP法：在PAP法中通過兩次連接橋抗體和PAP復(fù)合物而建立起來的，通過雙橋可結(jié)合更多的PAP復(fù)合物于抗原分子上，以增強(qiáng)敏感性。這種放大方式重復(fù)使用橋抗體，使橋抗體與PAP復(fù)合物中抗酶抗體的未充分飽和Fc段結(jié)合，或橋抗體與特異性第一抗體尚未飽和的Fc段結(jié)合。

（四）堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法（APAAP法）

辣根過氧化物酶（HRP）是免疫組化的首選用酶，但有些組織細(xì)胞含內(nèi)源性過氧化物酶限制了HRP的廣泛應(yīng)用，盡管用甲醇過氧化氫進(jìn)行處理可以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，但同時(shí)也會影響抗原的顯示。

APAAP法就是用堿性磷酸酶代替HRP建立的堿性磷酸酶（AP）-抗堿性磷酸酶（AAP）法，即簡稱APAAP。

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