《臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)》第九章:酶免疫技術(shù)
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【知識(shí)點(diǎn)名稱】酶免疫技術(shù)常用的底物
【進(jìn)階攻略】此知識(shí)點(diǎn)在考試大綱中屬于掌握內(nèi)容,常在《相關(guān)專業(yè)知識(shí)》中考查。
【知識(shí)點(diǎn)詳情】
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多,常用的有以下幾種:
(1)鄰苯二胺(OPD):OPD被認(rèn)為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色,加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色,最大吸收峰在492nm波長(zhǎng)。OPD是ELISA中應(yīng)用最早的底物,但其應(yīng)用液穩(wěn)定性差,易變色,需新配制后在1小時(shí)內(nèi)使用,顯色反應(yīng)過程需避光,而且具有致癌性。
(2)四甲基聯(lián)苯胺(TMB):TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色,加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色,最大吸收峰波長(zhǎng)為450nm。TMB具有穩(wěn)定性好,成色無(wú)需避光,無(wú)致突變作用等優(yōu)點(diǎn),已成為目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。缺點(diǎn)是水溶性差。
(3)其他:5-氨基水楊酸(5-ASA)和2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)也是HRP常用的底物。
2.AP的底物 常用對(duì)-硝基苯磷酸脂(p-NPP),p-NPP經(jīng)AP作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚,最大吸收峰波長(zhǎng)為405nm。
3.β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物 常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU),酶作用后,生成高強(qiáng)度熒光物4-甲基傘形酮(4-MU),其敏度性較HRP高30~50倍,但測(cè)量時(shí)需用熒光計(jì)。
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