補(bǔ)體總活性的測定知識(shí)點(diǎn)匯總!
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(一)檢測試劑:
綿羊紅細(xì)胞;
溶血素;
稀釋緩沖液。
(二)補(bǔ)體總活性測定的實(shí)驗(yàn)原理:
補(bǔ)體最主要的活性是溶細(xì)胞作用。
特異性抗體與紅細(xì)胞結(jié)合后可激活補(bǔ)體,導(dǎo)致紅細(xì)胞表面形成跨膜小孔,使胞外水分滲入,引起紅細(xì)胞腫脹而發(fā)生溶血。補(bǔ)體溶血程度與補(bǔ)體的活性相關(guān),但非直線關(guān)系。在一個(gè)適當(dāng)?shù)摹⒎€(wěn)定的反應(yīng)系統(tǒng)中,溶血反應(yīng)對補(bǔ)體的劑量依賴呈一特殊的S形曲線。如以溶血百分率為縱坐標(biāo),相應(yīng)血清量為橫坐標(biāo),可見在輕微溶血和接近完全溶血處,對補(bǔ)體量的變化不敏感。S形曲線在30%~70%之間最陡,幾乎呈直線,補(bǔ)體量的少許變動(dòng),也會(huì)造成溶血程度的較大改變,即曲線此階段對補(bǔ)體量的變化非常敏感。
因此,實(shí)驗(yàn)常以50%溶血作為終點(diǎn)指標(biāo),它比100%溶血更為敏感,這一方法稱為補(bǔ)體50%溶血實(shí)驗(yàn)即CH50。
(三)方法評價(jià):
CH50試驗(yàn)是測定經(jīng)典途徑總補(bǔ)體溶血活性,所反映的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。方法簡便、快速,但敏感性較低。
補(bǔ)體的溶血活性除與試驗(yàn)中反應(yīng)體積成反比外,還與反應(yīng)所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、鈣鎂濃度、綿羊紅細(xì)胞數(shù)量和反應(yīng)溫度有一定關(guān)系。
緩沖液pH和離子強(qiáng)度增高,補(bǔ)體活性下降,雖可穩(wěn)定溶血系統(tǒng),但過量則反而抑制溶血反應(yīng),故實(shí)驗(yàn)時(shí)對反應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)應(yīng)嚴(yán)加控制,統(tǒng)一步驟。
(四)臨床意義:
CH50法檢測是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性,所反映的主要是補(bǔ)體9種成分的綜合水平。
如果測定值過低或者完全無活性,首先考慮補(bǔ)體缺陷,可分別檢測C4、C2、C3和C5等成分的含量;嚴(yán)重肝病時(shí)血漿蛋白合成能力受損。
營養(yǎng)不良時(shí)蛋白合成原料不足,也可以不同程度地引起血清補(bǔ)體水平下降。
在患系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病時(shí),血清補(bǔ)體水平隨病情發(fā)生變化。
疾病活動(dòng)期補(bǔ)體活化過度,血清補(bǔ)體水平下降;病情穩(wěn)定后補(bǔ)體水平又反應(yīng)性增高。因此補(bǔ)體檢測常可作為自身免疫病診斷或是否有疾病活動(dòng)的參考指標(biāo)。
細(xì)菌感染特別是革蘭陰性細(xì)菌感染時(shí),常因補(bǔ)體旁路途徑的活化過度引起血清補(bǔ)體水平降低。心肌梗死、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊娠等情況下血清補(bǔ)體水平常升高。
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